Principios de microscopía de fluorescencia y características estructurales.
La microscopía de fluorescencia es el uso de una alta eficiencia de luminiscencia del punto, a través de la filtración del sistema de color para emitir una determinada longitud de onda de luz (como ultravioleta 3650 en el o violeta-azul 4200 en el) como luz de excitación, la excitación El material fluorescente dentro de la muestra emite una variedad de diferentes colores de fluorescencia y luego se magnifica a través del objetivo y los oculares para su observación. De esta manera, en el fondo de fuerte contraste, incluso si la fluorescencia es muy débil, es fácil de identificar, alta sensibilidad, utilizada principalmente para el estudio de la estructura y función celular y la composición química. La estructura básica de un microscopio de fluorescencia se compone de un microscopio óptico ordinario más algunos accesorios (como una fuente de luz de fluorescencia, filtros de excitación, separador de haz de dos colores y filtros de bloqueo, etc.). Fuente de luz fluorescente: generalmente se utiliza una lámpara de mercurio de presión ultraalta (50-200W), que puede emitir una variedad de longitudes de onda de luz, pero cada material fluorescente tiene una longitud de onda de excitación de fluorescencia más fuerte, por lo que es necesario agregar filtros de excitación (generalmente filtro de excitación ultravioleta, violeta, azul y verde), de modo que solo una cierta longitud de onda de luz de excitación pasa a través de la irradiación de las muestras, mientras que la otra luz es absorbida. Por lo tanto, es necesario agregar un filtro de excitación (generalmente filtros de excitación ultravioleta, violeta, azul y verde), de modo que solo una cierta longitud de onda de la luz de excitación atraviese la muestra, mientras que el resto de la luz sea absorbida. Cuando cada sustancia se irradia con luz de excitación, emite fluorescencia visible de una longitud de onda más larga que la de la luz irradiada en un tiempo muy corto. La fluorescencia tiene especificidad, generalmente más débil que la luz de excitación, para poder observar la fluorescencia específica, se debe seleccionar la lente objetivo detrás de la necesidad de agregar bloqueo (o supresión) para usar.
Microscopio de fluorescencia y diferencia entre microscopio ordinario.
1. El método de iluminación suele ser descendente, es decir, la fuente de luz se proyecta sobre la muestra a través de la lente del objetivo;
2. La fuente de luz es luz ultravioleta, con una longitud de onda más corta y un poder de resolución mayor que los microscopios comunes;
3. Hay dos filtros especiales, el que está frente a la fuente de luz se usa para filtrar la luz visible y el que está entre el ocular y el objetivo se usa para filtrar la luz ultravioleta para proteger el ojo humano.
El microscopio de fluorescencia también es un tipo de microscopio óptico, la principal diferencia es que la longitud de onda de excitación de los dos es diferente. Esto determina la estructura del microscopio de fluorescencia y del microscopio óptico ordinario y el uso de diferentes métodos.
El microscopio de fluorescencia es la herramienta básica para la citoquímica de inmunofluorescencia. Está compuesto por una fuente de luz, un sistema de placa de filtro, un sistema óptico y otros componentes importantes. Utiliza una determinada longitud de onda de luz para estimular la muestra para que emita fluorescencia, que se magnifica a través de la lente del objetivo y el sistema ocular para observar la imagen de fluorescencia de la muestra.
