Método de conteo directo de microorganismos bajo microscopio.
El recuento microscópico directo utilizando un hemocitómetro es un método común para el recuento microbiano. Este método presenta un funcionamiento intuitivo y una detección rápida. Se añade una suspensión bacteriana (o suspensión de esporas) adecuadamente diluida a la cámara de recuento entre el portaobjetos y el cubreobjetos de un hemocitómetro para el recuento microscópico. Dado que el volumen de la cámara de recuento es fijo (0,1 mm³), el número total de microorganismos por unidad de volumen se puede calcular según el recuento microbiano observado al microscopio. Como este método cuenta tanto células microbianas vivas como muertas, también se le conoce como método de recuento bacteriano total.
Un hemocitómetro es un portaobjetos de vidrio especialmente diseñado con cuatro ranuras que forman tres plataformas. La plataforma intermedia está dividida además en dos mitades por una corta ranura transversal. Un patrón de cuadrícula está grabado en cada mitad de la plataforma central, y cada cuadrícula consta de nueve cuadrados grandes. El gran cuadrado central sirve como cámara de recuento, donde se realiza el recuento microbiano. La estructura del hemocitómetro se muestra en la Figura Ⅷ-1.
Generalmente existen dos especificaciones para la graduación de las cámaras de recuento. En el primer tipo, un cuadrado grande se divide en 16 cuadrados medianos y cada cuadrado mediano se divide a su vez en 25 cuadrados pequeños (Figura Ⅷ-2). En el segundo tipo, un cuadrado grande se divide en 25 cuadrados medianos, y cada cuadrado mediano contiene 16 cuadrados pequeños (Figura Ⅷ-1, C). Independientemente de la especificación, el número total de cuadrados pequeños en un cuadrado grande sigue siendo constante: 16 × 25=400 cuadrados pequeños, como se muestra en la Figura Ⅷ-2.
Cada cuadrado grande tiene una longitud de lado de 1 mm, lo que da un área de 1 mm². Después de cubrir con un cubreobjetos, la altura entre el portaobjetos y el
el cubreobjetos es de 0,1 mm; por tanto, el volumen de la cámara de recuento es de 0,1 mm³.
Durante el conteo, generalmente se cuenta primero el número total de bacterias en cinco cuadrados medianos. Se calcula el recuento promedio de un único cuadrado mediano y luego se multiplica por 16 o 25 para obtener el recuento bacteriano total en un cuadrado grande. Finalmente, el recuento microbiano total por mililitro de suspensión bacteriana se puede convertir en consecuencia.
