Principio de funcionamiento del microscopio confocal láser.
La microscopía confocal láser se basa en imágenes de microscopio de fluorescencia con la adición de un dispositivo de escaneo láser, el uso de procesamiento de imágenes por computadora, la resolución de las imágenes ópticas aumentó en un 30% - 40%, el uso de excitación con luz ultravioleta o visible de fluorescentes. Se han convertido sondas, para obtener la imagen de fluorescencia de la microestructura interna de células o tejidos, a nivel subcelular para observar señales fisiológicas y cambios de morfología celular, como Ca2+, PH, potencial de membrana, etc. una nueva generación de poderosas herramientas de investigación en morfología, biología molecular, neurociencia, farmacología, genética y otros campos. El sistema de imágenes confocales por láser es una poderosa nueva generación de herramientas de investigación en los campos de morfología, biología molecular, neurociencia, farmacología, genética, etc. El sistema de imágenes confocales láser se puede utilizar para observar una variedad de tejidos y células teñidos, no teñidos y marcados con fluorescencia, etc., para observar y estudiar el crecimiento y desarrollo de secciones de tejido y células in vivo, y para estudiar y medir intracelulares. Transporte de sustancias y conversión de energía. Es capaz de realizar el estudio de cambios de iones y PH en células vivas (RATIO), investigación de neurotransmisores, tomografía diferencial de interferencia y fluorescencia, tomografía de fluorescencia múltiple y superposición, análisis de espectroscopia de fluorescencia de indicadores de fluorescencia de análisis cuantitativo de muestras de fluorescencia de tiempo- escaneo retardado y componentes dinámicos de la estructura dinámica tridimensional de tejidos y células, análisis de la transferencia de energía de resonancia de fluorescencia, investigación de hibridación fluorescente in situ (FISH), investigación del citoesqueleto (FISH) y estudio del citoesqueleto. FISH), investigación de citoesqueleto, investigación de localización de genes, análisis de productos de PCR en tiempo real in situ, investigación de recuperación de blanqueo fluorescente (FRAP), investigación de comunicación intercelular, investigación entre proteínas, investigación sobre potencial de membrana y fluidez de membrana, etc., para completar el análisis de análisis de imágenes y reconstrucción tridimensional y otros análisis.
Áreas de aplicación del sistema de microscopio confocal láser:
Incluye medicina, investigación científica animal y vegetal, bioquímica, **ología, biología celular, embriones de tejidos, ciencias de los alimentos, genética, farmacología, fisiología, óptica, patología, botánica, neurociencia, biología marina, ciencia de los materiales, ciencia electrónica, mecánica, petróleo. geología, mineralogía.
Principios básicos
El microscopio óptico tradicional utiliza una fuente de luz de campo, la imagen de cada punto de la muestra se verá interferida por la difracción o dispersión de la luz de los puntos vecinos; El microscopio confocal láser utiliza un rayo láser a través del orificio de iluminación para formar una fuente de luz puntual para escanear cada punto en el plano focal de la muestra; el punto irradiado en la muestra se tomará una imagen en el orificio de detección y luego será recibido por el orificio de detección después del tubo multiplicador de puntos (PMT) o el dispositivo de electroacoplamiento en frío (cCCD), punto por punto o línea por línea, y luego se muestra rápidamente en el monitor de la computadora. La imagen fluorescente, recibida punto por punto o línea por línea por el PMT o el CCD detrás del orificio de la sonda, se forma rápidamente en la pantalla del monitor de la computadora. El orificio de iluminación y el orificio de detección están conjugados con respecto al plano focal de la lente objetivo, los puntos en el plano focal se enfocan en el orificio de iluminación y el orificio de emisión al mismo tiempo, y los puntos fuera del plano focal no ser fotografiado en el orificio de detección, de modo que la imagen confocal obtenida sea una sección transversal óptica de la muestra, lo que supera la desventaja de la borrosidad de la imagen del microscopio ordinario.
