¿Por qué el aumento de la lente de aceite es mayor que el de la lente del objetivo ordinario?
Razones por las que es necesario fijar las bacterias antes de teñirlas en experimentos microbiológicos:
1: Mata las células, es fácil de teñir con colorante.
2: Haga que las bacterias se adhieran al portaobjetos de vidrio, y no es fácil de lavar con agua.
Al fijar, debe secarse lentamente. Si realmente quieres acelerar, puedes secarlo varias veces en la distancia sobre la llama de la lámpara de alcohol. No permita que el portaobjetos de vidrio se caliente, de lo contrario, puede destruir la forma de vida de las bacterias.
Tinción de Gram y observación microscópica de bacterias.
1. Principio experimental
Principio de tinción de Gram: las bacterias responden de manera diferente a la tinción de Gram debido a la composición y estructura de sus paredes celulares. La pared celular de las bacterias Gram-positivas es principalmente un nudo de red formado por peptidoglicano. Cuando se trata con etanol, el tamaño de los poros de la estructura de la red se vuelve más pequeño debido a la deshidratación y la permeabilidad disminuye, por lo que el complejo de cristal violeta-yodo La sustancia no es fácil de eluir y retener en la célula, y el azul- el color púrpura del agente de tinción primario aún se conserva después de la decoloración y la contratinción. La capa de peptidoglicano de la pared celular de las bacterias Gram negativas es delgada y el contenido de lípidos es alto, por lo que cuando se realiza el tratamiento de decoloración, el lípido se disuelve con etanol (o acetona), y aumenta la permeabilidad de la pared celular, por lo que que el complejo de cristal violeta-yodo es más fácil de eluir, y después de contrateñir con un contrateñido, las células se tiñen con el color rojo del contrateñido. Principio de imagen del microscopio: los microscopios ópticos ordinarios modernos utilizan dos sistemas de lentes de ocular y lente objetivo para ampliar la imagen, por lo que a menudo se denominan microscopios compuestos. En el sistema óptico del microscopio, el rendimiento de la lente del objetivo es el más crítico y el aumento de la lente de aceite es el más grande, que es el más importante para la investigación microbiológica. El objetivo principal de agregar aceite de inmersión entre el portaobjetos de vidrio y la lente es aumentar el brillo de la iluminación y aumentar la resolución del microscopio. Se utiliza aceite en lugar de aire como medio de transmisión de luz para reducir la refracción o reflexión total de la luz y hacer que la imagen observada sea más clara.
2. Equipo experimental
1. Colonias:
Escherichia coli cultivo inclinado en agar nutritivo 24h,
Staphylococcus aureus sobre cultivo inclinado en agar nutritivo de 24 horas, Bacillus subtilis 12-18h cultivo inclinado en agar nutritivo.
2. Soluciones o reactivos:
Agua destilada, solución de yodo, solución de tinción de cristal violeta, alcohol al 95 por ciento, solución de tinción de safranina, aceite de cedro. 3. Instrumento:
Microscopio, portaobjetos de vidrio, asa de inoculación, lámpara de alcohol, pinzas, tejido para lentes.
3. Pasos experimentales
a:
1. frotis
Saque el portaobjetos, encienda el portaobjetos, queme el alcohol en el portaobjetos y esterilícelo, ponga una pequeña gota de agua destilada en el medio, use el asa de inoculación para recoger suavemente una pequeña cantidad de bacterias en el medio inclinado de la prueba tubo, durante todo el proceso, la boca del tubo de ensayo debe estar por encima de la lámpara de alcohol, y la velocidad debe ser rápida para evitar la contaminación del medio de cultivo. Luego unte las pequeñas gotas de agua en el portaobjetos de vidrio con un movimiento circular, deténgase cuando las gotas de agua estén turbias y espere a que se sequen y se fijen.
2. Teñido primario
Vierta cristal violeta (es apropiado cubrir solo la película bacteriana) sobre la colonia, tiña durante 1-2 minutos, vierta la solución de tinción y enjuague con agua fina desde la parte superior del portaobjetos hasta que el eluido sea incoloro. y coloque la mancha en el portaobjetos. Sacude el agua de las rodajas.
3. Mordiente
Agregue la solución de yodo gota a gota para eliminar el agua residual, cubra durante aproximadamente 1 minuto y lave con agua.
4. Decoloración
Sacuda el agua del portaobjetos de vidrio, incline el portaobjetos de vidrio y agregue alcohol al 95 por ciento para decolorarlo debajo del fondo blanco, hasta que el alcohol que sale no se vea azul, enjuague inmediatamente el alcohol con agua y coloque el portaobjetos de vidrio Agitar del agua en las rebanadas.
5. Contratinción
Contrateñe con solución de safranina durante aproximadamente 1-2 minutos, lave con agua y luego seque con papel absorbente.
6. Examen microscópico:
Busque la colonia bacteriana a observar bajo el lente de bajo aumento (siga moviendo la corredera, si siente una sombra roja, deténgase inmediatamente, ajuste el aumento, si no es una colonia, continúe buscando), levante el cilindro del lente, y luego cambie al espejo de aceite. Agregue una gota de aceite de cedro al área de la muestra y baje con cuidado el cilindro de la lente con el ajustador grueso para que la lente de aceite se sumerja en el aceite y casi toque la muestra. Eleve el condensador a la posición más alta y abra completamente la apertura, use el ajustador grueso para levantar el cilindro de la lente lentamente hasta que la imagen del objeto aparezca en el campo de visión y use el ajustador fino para que quede clara y enfocada.
