Uso de Microscopía de Fluorescencia: Técnicas y Habilidades
Parámetros técnicos del microscopio de fluorescencia 1. Ocular gran angular 2. Lente objetivo acromática 3. Convertidor de lente objetivo de cuatro orificios 4. Dispositivo epifluorescente Sistema de excitación azul (B) verde (G) Lámpara de mercurio 100W 5. Mecanismo de ajuste de enfoque fino y grueso coaxial: ajuste Rango de enfoque: 15 mm Valor de cuadrícula de micromovimiento: 0,002 mm 6. Mesa mecánica de doble capa Rango de movimiento longitudinal: 70 mm Rango de movimiento lateral: 50 mm
Usa el método de habilidad
(1) portaobjetos de vidrio
El grosor del portaobjetos de vidrio debe estar entre 0,8 y 1,2 mm. Un portaobjetos demasiado grueso absorberá más luz por un lado y, por otro lado, la luz de excitación no se podrá concentrar en la muestra. Los portaobjetos deben ser lisos, de grosor uniforme y libres de autofluorescencia obvia. A veces se utilizan portaobjetos de vidrio de cuarzo.
(2) cubierta de vidrio
El grosor de la cubierta de vidrio es de aproximadamente 0.17 mm, liso. Para fortalecer la luz de excitación, también se puede usar un cubreobjetos de interferencia, que es un cubreobjetos especial recubierto con varias capas de sustancias (como el fluoruro de magnesio) que tienen diferentes efectos de interferencia sobre la luz de diferentes longitudes de onda, lo que puede hacer que la la fluorescencia va sin problemas. La luz excitante pasa y se refleja, y esta luz de excitación reflejada excita la muestra.
(3) Muestra
Las rebanadas de tejido u otras muestras no deben ser demasiado gruesas. Si es demasiado grueso, la mayor parte de la luz de excitación se consumirá en la parte inferior de la muestra, mientras que la parte superior observada directamente por la lente del objetivo no se excitará por completo. Además, la superposición de células o la cubierta de impurezas afectan el juicio.
(4) agente de montaje
La glicerina se usa comúnmente como agente de montaje, que no debe tener autofluorescencia, incolora y transparente, y el brillo de la fluorescencia es más brillante a pH 8.5-9.5, y no es fácil que se desvanezca rápidamente. Por lo tanto, una mezcla a partes iguales de glicerol y 0,5 mol/l de solución tampón de carbonato con un pH de 9,0 a 9,5 se usa comúnmente como agente de montaje.
(5) aceite de espejo
Generalmente, cuando se observan muestras con microscopios de fluorescencia de campo oscuro y lentes de inmersión en aceite, se debe usar aceite de inmersión. Lo mejor es utilizar un aceite de inmersión especial no fluorescente. En su lugar, también se puede usar la glicerina anterior y también se puede usar parafina líquida, pero el índice de refracción es bajo, lo que tiene un ligero impacto en la calidad de la imagen. Influencia.
