La estructura y componentes principales de un microscopio de fluorescencia.
(1) Fuente de luz
Hoy en día, se utiliza habitualmente como fuente de luz una lámpara de mercurio de presión ultraalta de 200 W. Está hecho de vidrio de cuarzo, con forma esférica en el medio y con una cierta cantidad de mercurio en su interior. Durante el funcionamiento, la descarga entre los dos electrodos hace que el mercurio se evapore y la presión dentro de la esfera aumenta rápidamente. Cuando el mercurio se evapora por completo, puede alcanzar 50-70 presiones atmosféricas estándar, lo que generalmente demora alrededor de 5-15 minutos. La luminiscencia de las lámparas de mercurio de ultra alta presión es el resultado de la descarga entre electrodos, que continuamente disocia y reduce las moléculas de mercurio y emite fotones. Emite una fuerte luz ultravioleta y azul violeta, que es suficiente para excitar diversas sustancias fluorescentes, por lo que se utiliza ampliamente en microscopios de fluorescencia.
Las lámparas de mercurio de ultra alta presión también emiten una gran cantidad de energía térmica. Por lo tanto, la sala de lámparas debe tener buenas condiciones de disipación de calor y la temperatura ambiente de trabajo no debe ser demasiado alta.
La nueva lámpara de mercurio de presión ultraalta no requiere alto voltaje para encenderse en la etapa inicial de uso. Después de un tiempo de uso, es necesario encenderlo con alto voltaje (aproximadamente 15000 V). Después del arranque, el voltaje de trabajo generalmente se mantiene en 50-60 V y la corriente de trabajo es de aproximadamente 4 A. La vida útil promedio de una lámpara de mercurio de presión ultraalta de 200 W es de aproximadamente 200 h cuando se utiliza durante 2 horas cada vez. Cuanto más corto sea el tiempo de funcionamiento, más corta será la vida útil. Si se utiliza sólo durante 20 minutos una vez, la vida útil se reduce en un 50%. Por lo tanto, trate de minimizar el número de inicios cuando lo utilice. La eficiencia luminosa de una bombilla disminuye gradualmente durante su uso. Después de que se apaga la luz, es necesario esperar a que se enfríe antes de reiniciar. Después de encender la bombilla, no se debe apagar inmediatamente para evitar la evaporación incompleta del mercurio y daños al electrodo. Generalmente es necesario esperar 15 minutos. Debido a la alta presión y la fuerte radiación ultravioleta de la lámpara de mercurio de presión ultraalta, la bombilla debe colocarse en la cámara de la lámpara antes de encenderse para evitar lesiones oculares y explosiones durante el funcionamiento.
El circuito de una fuente de luz de lámpara de mercurio de presión ultraalta (100 W o 200 W) y sus componentes, incluida la transformación de voltaje, la supresión de corriente y el arranque. Hay un sistema para ajustar el centro de luz de la bombilla en la sala de la lámpara, con un reflector cóncavo chapado en aluminio instalado detrás de la bombilla y una lente colectora de luz instalada en el frente.
La lámpara de mercurio de presión ultraalta GCQ-200 de producción nacional tiene un buen rendimiento y puede reemplazar las bombillas importadas como HBO-200, con una vida útil promedio de más de 200 horas y un precio relativamente bajo.
Un dispositivo de fuente de luz fluorescente de tungsteno de bromo de alta temperatura de color, simple y portátil, desarrollado en China, con volumen pequeño, peso liviano, bajo consumo, uso dual de CA y CC (con fuente de alimentación de CC incorporada), fácil de transportar y cómodo de usar. , ha sido promovido y aplicado.
(2) Sistema de filtrado de color
El sistema de filtro de color es una parte importante de un microscopio de fluorescencia y consta de una placa de filtro de excitación y una placa de filtro de compresión. El modelo de placa filtrante suele ser contradictorio entre los fabricantes. Las placas de filtro generalmente reciben el nombre del tono de color básico, donde la primera letra representa el tono de color, la segunda letra representa el vidrio y el número representa las características del modelo. microscopio olimpo
(3) Lente objetivo
Se pueden aplicar varios objetivos, pero el uso de objetivos acromáticos es adecuado para la fluorescencia debido a su extremadamente bajo rendimiento de autofluorescencia y transmitancia (rango de longitud de onda). Debido al hecho de que el brillo de fluorescencia de la imagen en el campo de visión del microscopio es directamente proporcional al cuadrado de la relación de apertura de la lente del objetivo e inversamente proporcional a su aumento, para mejorar el brillo de la imagen de fluorescencia, se utiliza una lente de objetivo. Se deben utilizar cámaras con una relación de apertura mayor. Especialmente con un gran aumento, su impacto es muy significativo. Por lo tanto, para muestras con fluorescencia insuficiente, se debe utilizar una lente objetivo con una tasa de apertura alta, combinada con un ocular lo más bajo posible (4 x, 5 x, 6,3 x, etc.).
(4) espejo reflectante
La capa reflectante de un reflector generalmente está chapada en aluminio porque el aluminio absorbe menos luz ultravioleta y visible en la región azul violeta, con una reflexión superior al 90%, mientras que la plata solo refleja el 70%; Generalmente se utilizan reflectores planos.
(5) Espejo reflector
El concentrador diseñado y fabricado específicamente para microscopía de fluorescencia está hecho de vidrio de cuarzo u otro vidrio que transmita luz ultravioleta. Hay dos tipos de observadores de campo oscuro con un campo de visión distinto. También hay un concentrador de fluorescencia diferencial.
(6) Dispositivo de luz descendente
El nuevo tipo de dispositivo de luz incidente refleja las partes de longitud de onda más corta (ultravioleta y azul púrpura) desde la fuente de luz al filtro del espectrofotómetro de interferencia debido a las propiedades del recubrimiento del filtro. Cuando el filtro mira hacia la fuente de luz en un ángulo de 45 grados. Cuando se inclina, se dirige verticalmente hacia la lente del objetivo y se dirige hacia la muestra a través de la lente del objetivo, lo que provoca que la muestra se excite. En este punto, la lente del objetivo actúa directamente como condensador. Al mismo tiempo, las partes largas del filtro (verde, amarillo, rojo, etc.) son transparentes al filtro, por lo que no reflejan en la dirección del objetivo. El filtro actúa como una placa de filtro de excitación y, debido a que la fluorescencia de la muestra se encuentra en la región de longitud de onda larga de la luz visible, se puede observar a través del filtro y alcanzar el objetivo. El brillo de la imagen fluorescente aumenta con el aumento y es más fuerte que la fuente de luz transmitida con un gran aumento. Además de su función como fuente de luz transmisora, es más adecuado para la observación directa de muestras opacas y semitransparentes, como placas gruesas, membranas filtrantes, colonias, muestras de cultivos de tejidos, etc. En los últimos años, los microscopios de fluorescencia recientemente desarrollados a menudo Utilice dispositivos de luz descendente, conocidos como microscopios de fluorescencia de luz descendente.
