La diferencia entre microscopía de fluorescencia de transmisión y microscopía de fluorescencia de reflexión.
1. Microscopio de fluorescencia de transmisión: la fuente de luz de excitación se transmite a través del material de la muestra a través de un condensador para excitar la fluorescencia. Se pueden utilizar concentradores de campo oscuro de uso común, o concentradores ordinarios, para ajustar el reflector para convertir la luz de excitación y la luz lateral sobre la muestra. Este es un microscopio de fluorescencia relativamente anticuado. Su ventaja es una fuerte fluorescencia a bajo aumento, mientras que su desventaja es que su fluorescencia se debilita al aumentar el aumento. Por lo tanto, es mejor para observar materiales de muestra más grandes.
2. Microscopio de fluorescencia de haz descendente: este es un nuevo tipo de microscopio de fluorescencia que se ha desarrollado en los tiempos modernos. A diferencia del anterior, la luz de excitación cae desde la lente objetivo sobre la superficie de la muestra, utilizando la misma lente objetivo como condensador de iluminación y lente objetivo para recoger la fluorescencia. Es necesario agregar un separador de haz de doble color al camino óptico, que forma un ángulo de 45 grados con el fotouranio. La luz de excitación se refleja en la lente del objetivo y se concentra en la muestra. La fluorescencia generada por la muestra y la luz de excitación reflejada desde la superficie de la lente del objetivo y el cubreobjetos ingresan simultáneamente a la lente del objetivo y regresan al separador de haz de doble color, separando la luz de excitación y la fluorescencia. La luz de excitación residual es absorbida entonces por el filtro de bloqueo. Si se utilizan diferentes combinaciones de filtros de excitación, separadores de haz de dos colores y filtros de bloqueo, pueden satisfacer las necesidades de diferentes productos de reacción fluorescentes. Las ventajas de este microscopio fluorescente son la iluminación uniforme del campo de visión, imágenes claras y una fluorescencia más intensa con mayor aumento.
Las ventajas y desventajas de la microscopía de fluorescencia de transmisión.
Fuente de luz: Lámpara de mercurio de alta presión o lámpara halógena.
Espejo de foco: uso de un foco de campo oscuro para separar la excitación y la fluorescencia.
Lente objetivo: Se puede utilizar cualquier tipo de lente objetivo.
Muestra: Las muestras delgadas son más adecuadas para la observación de la transmisión.
Ventajas: ① Debido al uso de un condensador de campo oscuro, la luz de excitación no puede ingresar a la lente del objetivo, lo que facilita la formación de un fondo oscuro y logra un buen contraste, y se puede usar cualquier lente de objetivo para la observación. ② Cuando se utiliza un objetivo de bajo aumento, es más brillante que un microscopio de fluorescencia reflectante.
Desventaja: El centro y la altura del foco deben ajustarse correctamente; de lo contrario, no se podrá obtener una imagen fluorescente brillante. Debido a la limitación de la distancia focal del foco de campo oscuro, no se pueden utilizar diapositivas de vidrio grueso. El área de iluminación del campo de visión no debe ser demasiado grande, de lo contrario podría provocar que el color fluorescente de la muestra fluorescente se desvanezca. Las muestras gruesas u opacas no son adecuadas.
