Uso y precauciones del microscopio de fluorescencia estéreo
Instrucciones:
(1) Coloque la hoja de material en el escenario.
(2) Encienda el estabilizador de voltaje del microscopio fluorescente. Luego presione el grupo de inicio para encender la lámpara UV y no la apague dentro de los 15 minutos, y no la vuelva a encender dentro de los 3 minutos posteriores a su apagado.
(3) Gire el filtro de excitación a v, el filtro de separación de color a v y seleccione un filtro de bloqueo de 495 o 475 nm.
(4) Elija el microscopio objetivo fluorescente uvFL40, uvFL100 para el examen microscópico.
(5) Agregue aceite no fluorescente en el portaobjetos, primero use 40 x y luego use un microscopio de enfoque de 100 x para verificar. Aparece la fluorescencia.
(7) Dado que la fluorescencia de las sustancias fluorescentes se debilita gradualmente con el tiempo cuando son irradiadas con luz ultravioleta, el campo de visión debe cambiarse con frecuencia durante el examen microscópico.
(8) Los microscopios de bajo aumento uvFL10 o uvFL20 también se pueden usar para inspeccionar materiales (no se agrega aceite fluorescente cuando se usan lentes de bajo aumento).
Método de grabación de la imagen de fluorescencia:
La imagen de fluorescencia vista por el microscopio de fluorescencia tiene tanto características morfológicas como color y brillo de fluorescencia. Al juzgar los resultados, los dos deben combinarse para obtener un juicio integral. Los resultados se registran en base a indicadores subjetivos, es decir, observación visual por parte de los trabajadores. Como observación cualitativa general, básicamente confiable. Con el desarrollo de la tecnología y la ciencia, se utilizan indicadores objetivos para registrar los resultados del juicio en diversos grados, como espectrofotómetros de células, analizadores de imágenes y otros instrumentos. Sin embargo, los resultados registrados por estos instrumentos también deben combinarse con juicios subjetivos.
La fotografía con microscopio de fluorescencia es muy necesaria para registrar imágenes de fluorescencia. Dado que la fluorescencia es fácil de desvanecer y debilitarse, es necesario registrar los resultados en tiempo real. El método es básicamente el mismo que el de la microfotografía ordinaria. Solo necesita usar una película fotosensible de alta velocidad como ASA200 o superior o 24. superior. Debido a que la luz ultravioleta tiene un fuerte efecto en la extinción de la fluorescencia, como los marcadores FITC, el brillo de la fluorescencia disminuirá en un 50 por ciento cuando se irradie con luz ultravioleta durante 30 s. Por lo tanto, si la velocidad de exposición es demasiado lenta, no se puede tomar la imagen fluorescente. Los microscopios de fluorescencia de investigación general tienen dispositivos de sistemas de fotomicrografía semiautomáticos o totalmente automáticos.
Precauciones:
(1) Opere estrictamente de acuerdo con los requisitos de las instrucciones de fábrica del microscopio de fluorescencia y no cambie el programa a voluntad.
(2) La inspección debe llevarse a cabo en una habitación oscura. Después de ingresar al cuarto oscuro, conecte la fuente de alimentación y encienda la lámpara de mercurio de ultra alta presión durante 5-15 minutos. Después de que la fuerte luz de la fuente de luz se estabilice, los ojos se adaptan completamente al cuarto oscuro y luego comienzan a observar la muestra.
(3) Para evitar que los rayos ultravioleta dañen los ojos, se deben usar anteojos protectores al ajustar la fuente de luz.
(4) El tiempo de inspección es preferiblemente 1-2 horas cada vez. Si excede los 90 minutos, la intensidad luminosa de la lámpara de mercurio de ultra alta presión disminuirá gradualmente y la fluorescencia se debilitará; después de irradiar la muestra con rayos ultravioleta durante 3-5 minutos, la fluorescencia también se debilitará significativamente; por lo tanto, no debe exceder las 2-2 horas como máximo. 3 horas
(5) La vida útil de la fuente de luz del microscopio de fluorescencia es limitada y las muestras deben inspeccionarse colectivamente para ahorrar tiempo y proteger la fuente de luz. Cuando hace calor, se deben agregar ventiladores para disipar el calor, y las nuevas bombillas se deben registrar desde el comienzo de su tiempo de uso. Cuando desee volver a utilizarla después de que la lámpara se haya apagado, debe esperar a que la bombilla se haya enfriado lo suficiente antes de encenderla. Evite encender la fuente de luz varias veces al día.
(6) Observe la muestra inmediatamente después de la tinción, ya que la fluorescencia se debilitará gradualmente con el tiempo. Si la muestra se almacena en una bolsa de plástico de polietileno a 4 grados, el tiempo de debilitamiento de la fluorescencia se puede retrasar y se puede evitar que el agente de montaje se evapore.
(7) Estándar de juicio del brillo de la fluorescencia: generalmente se divide en cuatro niveles, es decir, "uno": se puede ver una fluorescencia débil o nula. " plus ": solo se puede ver una fluorescencia claramente visible. " plus plus "—Visible y brillante
