Métodos y pasos de procesamiento de muestras para microscopía electrónica.
Antes de utilizar un microscopio electrónico de transmisión para observar muestras biológicas, las muestras deben procesarse previamente. Los científicos utilizan diferentes métodos de procesamiento según lo requieran los diferentes requisitos de investigación.
Fijación: Para preservar la muestra tanto como sea posible, se usa glutaraldehído para endurecer la muestra y ácido ósmico para teñir la grasa.
Fijación en frío: La muestra se congela rápidamente en etano líquido para que el agua no cristalice y forme hielo amorfo. Las muestras conservadas de esta forma sufren menos daños, pero el contraste de la imagen es muy bajo.
Deshidratación: Utilice etanol y acetona para sustituir el agua.
Acolchado: La muestra se puede dividir después de ser rellenada.
Segmentación: La muestra se corta en rodajas finas utilizando un disco de diamante.
Tinción: los átomos pesados, como el plomo o el uranio, dispersan los electrones con más fuerza que los átomos más ligeros y, por lo tanto, pueden usarse para aumentar el contraste.
Antes de utilizar un microscopio electrónico de transmisión para observar metales, la muestra debe ser
Virus bajo un microscopio electrónico.
Cortar en rodajas muy finas (aproximadamente 0.1 mm) y luego usar pulido electrolítico para continuar adelgazando el metal a menudo termina formando un agujero en el centro de la muestra por donde los electrones pueden pasar a través del metal muy delgado allí. Los metales que no pueden pulirse electrolíticamente o los materiales que no son conductores o tienen mala conductividad, como el silicio, generalmente se adelgazan mecánicamente y luego se procesan mediante ataque iónico. Para evitar que las muestras no conductoras acumulen electricidad estática en un microscopio electrónico de barrido, sus superficies deben cubrirse con una capa conductora.
¿Por qué los microscopios electrónicos tienen mayor resolución?
Como sugiere el nombre, el llamado microscopio electrónico es un microscopio que utiliza haces de electrones como fuente de iluminación. Dado que el haz de electrones puede curvarse bajo la acción de un campo magnético externo o un campo eléctrico, formando un fenómeno de refracción similar al de la luz visible que atraviesa el vidrio, podemos utilizar este efecto físico para crear una "lente" para el haz de electrones, con lo que desarrollando un microscopio electrónico. La característica de un microscopio electrónico de transmisión (TEM) es que utilizamos haces de electrones que pasan a través de la muestra para obtener imágenes, lo cual es diferente de un microscopio electrónico de barrido (Scanning Electron Microscope, SEM). Dado que la longitud de onda de las ondas de electrones es mucho más pequeña que la longitud de onda de la luz visible (la longitud de onda de las ondas de electrones de 100kV es 0,0037 nm, mientras que la longitud de onda de la luz violeta es de 400 nm), según la óptica En teoría, podemos esperar que el poder de resolución de los microscopios electrónicos sea mucho mejor que el de los microscopios ópticos. De hecho, la capacidad de resolución de los microscopios electrónicos modernos ha alcanzado los 0,1 nm. El libro de texto optativo de física para estudiantes de secundaria lo explica con más detalle (pequeña información detrás del efecto fotoeléctrico)
