Requisitos para la preparación de portaobjetos de microscopio fluorescente.
(1) Portaobjetos de vidrio
El grosor de la diapositiva debe estar entre 0.8 y 1,2 mm. Si el portaobjetos es demasiado grueso, por un lado, absorberá más luz y, por otro lado, no permitirá que la luz de excitación se acumule en la muestra. El portaobjetos de vidrio debe ser liso, de espesor uniforme y no tener fluorescencia espontánea evidente. A veces se necesitan portaobjetos de vidrio de cuarzo.
(2) Portaobjetos de vidrio
El grosor del cubreobjetos es de aproximadamente 0.17 mm y es liso. Para mejorar la luz de excitación, también se puede utilizar un cubreobjetos de interferencia. Se trata de un cubreobjetos especialmente diseñado con varias capas de sustancias (como el fluoruro de magnesio) que tienen diferentes efectos de interferencia sobre la luz de diferentes longitudes de onda. Puede permitir que la fluorescencia pase suavemente, mientras que la luz de excitación reflejada puede excitar la muestra.
(3) Muestra
Las rodajas de tejido u otras muestras no deben ser demasiado gruesas. Si son demasiado gruesos, la mayor parte de la luz de excitación se consume en la parte inferior de la muestra, mientras que la parte superior observada directamente por el objetivo no se excita completamente. Además, la superposición de células o el enmascaramiento de impurezas pueden afectar el juicio.
(4) Agente sellador
Como agente de montaje se utiliza habitualmente glicerina, que no debe tener fluorescencia espontánea, ser incolora y transparente. El brillo de la fluorescencia es relativamente brillante a pH 8,5-9.5 y no es fácil que se desvanezca rápidamente. Por lo tanto, una mezcla igual de glicerol y tampón carbonato 0.5mol/L con pH 9.0-9.5 se usa comúnmente como agente sellador.
(5) Aceite para espejos
Cuando se utiliza un microscopio de fluorescencia de campo oscuro y un microscopio de aceite para observar muestras, se debe utilizar aceite para espejos. Se puede utilizar aceite especial para espejos no fluorescente o glicerol como sustituto. También se puede utilizar parafina líquida, pero el índice de refracción es bajo y tiene un ligero impacto en la calidad de la imagen.
