Principios y características estructurales del microscopio de fluorescencia
El microscopio de fluorescencia utiliza una fuente de luz de punto altamente eficiente para emitir una cierta longitud de onda de la luz (como la luz ultravioleta 3650 o la luz azul púrpura 4200) a través de un sistema de filtro de color como luz de excitación, que excita las sustancias fluorescentes en la muestra para emitir varios colores de fluorescencia, y luego observa a través del aumento de la lente objetivo y ojo. De esta manera, incluso con fluorescencia débil en un fondo fuerte, es fácil de reconocer y tiene una alta sensibilidad. Se utiliza principalmente para el estudio de la estructura celular, la función y la composición química. La estructura básica de un microscopio de fluorescencia está compuesta por un microscopio óptico regular y algunos accesorios, como una fuente de luz fluorescente, un filtro de excitación, un divisor de haz de doble color y un filtro de bloqueo. Fuente de luz fluorescente: generalmente utiliza lámparas de mercurio de presión ultra alta (50-200 W), que puede emitir luz de varias longitudes de onda, pero cada sustancia fluorescente tiene una longitud de onda de luz de excitación que produce una fuerte fluorescencia. Por lo tanto, los filtros de excitación (generalmente se deben agregar filtros de excitación ultravioleta, púrpura, azul y verde) para permitir que solo pase una cierta longitud de onda de la luz de excitación e irradie la muestra, mientras absorbe toda la otra luz. Después de ser irradiado con la luz de excitación, cada sustancia emite fluorescencia visible con una longitud de onda más larga que la longitud de onda de irradiación en un período de tiempo muy corto. La fluorescencia tiene especificidad y generalmente es más débil que la luz de excitación. Para observar una fluorescencia específica, se debe agregar un filtro de bloqueo (o supresión) detrás de la lente objetivo. Sus funciones son dobles: primero, para absorber y bloquear la luz de excitación de ingresar al ocular para evitar perturbar la fluorescencia y dañar los ojos; Segundo, para seleccionar y permitir que pase fluorescencia específica, exhibiendo un color fluorescente específico. Se deben usar dos tipos de filtros en combinación.
