Preparación y Observación de Muestras Biológicas para Microscopios Electrónicos
La resolución de un microscopio depende de la longitud de onda de la luz utilizada. El microscopio electrónico, que surgió en 1933, alcanzó una resolución significativamente mayor que un microscopio óptico debido al uso de haces de electrones con longitudes de onda mucho más cortas que la luz visible como fuentes de luz. Las diferentes fuentes de luz determinan también una serie de diferencias entre los microscopios electrónicos y los microscopios ópticos.
Según las diferencias en los principios de la obtención de imágenes por haz de electrones y las formas en que actúan sobre las muestras, los microscopios electrónicos modernos se han desarrollado en muchos tipos. Actualmente, los más utilizados son los microscopios electrónicos de transmisión y los microscopios electrónicos de barrido. El primero tiene un aumento total que puede variar entre 1000-10000000 veces, mientras que el segundo tiene un aumento total que puede variar entre 20-300000 veces. Este experimento introduce principalmente la preparación de dos tipos de muestras de microscopio, microscopía electrónica de transmisión y microscopía electrónica de barrido.
2, equipo
1. Se inclina la cepa Escherichia coli.
2. Solución o reactivo: acetato de pentilo, ácido sulfúrico concentrado, etanol anhidro, agua esterilizada, solución acuosa de fosfotungstato de sodio al 2% (pH 6,5-8,0), solución de polivinil formaldehído al 0,3% (disuelto en cloroformo), citocromo c, acetato de amonio, plásmido pBR322.
3. Los instrumentos u otras herramientas incluyen microscopios ópticos comunes, redes de cobre, embudos de porcelana, vasos de precipitados, placas de Petri, goteros estériles, pinzas estériles, alfileres, portaobjetos de vidrio, placas de conteo, máquinas de recubrimiento al vacío, secadores de puntos críticos, etc.
3, pasos de operación
(1) Preparación y observación de muestras para microscopía electrónica de transmisión.
1. Tratamiento de malla metálica
La muestra de un microscopio óptico se coloca sobre un portaobjetos de vidrio para su observación. Sin embargo, en un espejo de transmisión, dado que los electrones no pueden penetrar la lámina de vidrio, sólo se puede utilizar un material de malla como soporte, comúnmente denominado malla portadora. La malla portadora se puede dividir en varias especificaciones debido a los diferentes materiales y formas, entre las cuales se usa comúnmente malla de cobre con malla 200-400 (número de orificios). La malla de cobre debe tratarse antes de su uso para eliminar la suciedad y mantenerla limpia; de lo contrario, afectará la calidad de la película de soporte y la claridad de las fotografías de la muestra. La malla de cobre de malla 400 utilizada en este experimento se puede tratar mediante el siguiente método: primero, remojar y flotar con acetato de pentilo durante unas horas, luego enjuagar varias veces con agua destilada y finalmente sumergir y hacer flotar la malla de cobre en etanol anhidro para deshidratación. Si la malla de cobre aún no está limpia después de los métodos anteriores, se puede remojar en ácido sulfúrico concentrado diluido (1:1) durante 1 a 2 minutos, o hervir en una solución de NaOH al 1% durante unos minutos, enjuagar varias veces con agua destilada y luego deshidratarla en etanol anhidro para su uso posterior.
