Medidor de PH - Determinación y ajuste del pH del medio
Todos los microorganismos se ven afectados por el pH del medio ambiente en el que viven. A menudo, la presencia de especies selectivas reduce el rango de pH en el que crecen. En ocasiones, la acidez o alcalinidad del medio también puede actuar como factor de selección del crecimiento. Sin embargo, para los medios de prueba bioquímicos, el rango de pH en el que los microorganismos exhiben actividad tk en el sustrato es más estrecho que el rango de pH requerido para el crecimiento: por lo tanto, es importante ajustar el pH de los medios al rango esperado. Cuando el laboratorio prepara el medio de acuerdo con la composición del medio, se debe controlar y ajustar el pH. Debe señalarse que incluso para el medio deshidratado sintético listo para usar proporcionado por el fabricante (especialmente para algunos medios deshidratados estándar), el pH final debe medirse después de fabricar el medio experimental.
La forma más precisa de medir el pH de un medio es con un medidor de pH. Antes de su uso, debe calibrarse con una solución tampón estándar de pH conocido (por lo general, el pH es de 4 a 7). Enjuague el electrodo del medidor de pH con agua destilada y sumérjalo en el medio de cultivo en el vaso de precipitados, y luego lea el pH del medio de cultivo en la escala del medidor de pH. Cada fabricante proporciona instrucciones de funcionamiento detalladas para cada tipo de medidor de pH.
Al preparar el medio de cultivo, el PH se puede ajustar fácilmente usando un medidor de pH con agitación mecánica. El medio de cultivo debe prepararse en un recipiente (como un vaso de precipitados grande) que pueda agitarse continuamente. o imanes envueltos en teflón. El pH del medio que contiene agar debe ajustarse después de la descongelación, lo que se hace fácilmente con un agitador magnético calentable. Al ajustar el pH, utilice primero una solución tampón estándar de pH conocido para calibrar el medidor de pH. Luego coloque el electrodo compuesto y el termómetro de resistencia (si lo hay) en el medio, agregue lentamente la cantidad adecuada de ácido clorhídrico e hidróxido de sodio desde el extremo del vaso lejos del electrodo, para que el medio pueda alcanzar y mantener el pH requerido.
La compensación de temperatura del medidor de pH debe tener en cuenta el efecto de la temperatura en el sistema de electrodos: en algunas diluciones y medios, el pH cambia considerablemente con la temperatura. Para medios líquidos y diluciones, el pH generalmente se puede ajustar y medir a 25 grados oa la temperatura a la que se usan.
El pH del medio de agar debe ajustarse después de la disolución, y la temperatura de disolución es superior a 45 grados: por lo tanto, el pH del medio sólido debe determinarse a su temperatura de uso. En este momento, se debe usar un electrodo compuesto de cabeza plana y la compensación de temperatura del medidor de pH debe calibrarse manualmente. Al preparar el medio de cultivo, si se determina que el pH del medio de cultivo es diferente entre el estado de fusión y el estado de solidificación, significa que hay un error en el ajuste del pH.
Asimismo, cuando el medio preparado se esteriliza con calor (por ejemplo, en autoclave), también puede sufrir cambios de pH. Para el medio deshidratado, el fabricante ha tenido esto en cuenta y, por lo general, no es necesario ajustar el pH, pero se debe verificar cuidadosamente el pH del medio que se utilizará. Si el pH del medio de agar deshidratado debe ajustarse durante la redisolución o preparación, es mejor ajustarlo con ácido clorhídrico esterilizado por filtración y solución de hidróxido de sodio después del paso de esterilización para evitar la formación de sobrecalentamiento del medio. Al preparar medios con diferentes materias primas o productos farmacéuticos, se debe comprobar el pH de los medios después del autoclave. Además, si se encuentra que el pH del medio cambia igual después de cada autoclave, el pH puede ajustarse apropiadamente al preparar el medio. Sin embargo, aún es necesario determinar el pH final del medio después de la esterilización.
