Ventajas y desventajas de la microscopía de barrido láser multifotónica
La microscopía de barrido láser multifotón es un método experimental basado en la tecnología de microscopía de barrido láser que proporciona capacidades de corte óptico más precisas en la visualización 3D. El método de excitación por fluorescencia multifotónica utiliza longitudes de onda largas de luz roja o infrarroja cercana para adquirir imágenes fluorescentes de alta resolución de especímenes con una destrucción mínima de especímenes activos, lo que lo hace adecuado para obtener imágenes de células vivas, especialmente tejidos vivos gruesos como cortes de cerebro, embriones, órganos completos e incluso organismos completos.
Las ventajas son las siguientes:
1, el uso de excitación de luz roja o luz infrarroja, la dispersión de la luz es pequeña (la dispersión de partículas pequeñas y la longitud de onda de la cuarta potencia de la relación inversa).
2, no requiere un orificio, puede recolectar más fotones dispersos de la sección transversal de imágenes.
3, el agujero estenopeico no puede distinguir entre los fotones dispersos emitidos por la región desenfocada o el área focal, la relación señal-ruido de imágenes profundas de fotones múltiples es buena.
4, excitación de fotón único de luz ultravioleta o visible utilizada en el haz para alcanzar el plano focal antes de que la muestra se absorba y atenúe fácilmente, no es fácil de excitar profundamente.
5, en la observación del microscopio biológico, * la primera consideración es no dañar el estado activo del organismo en sí, mantener el agua, la concentración de iones, el oxígeno y la circulación de nutrientes. En ocasiones de observación de luz, tanto la energía térmica como la fotónica deben permanecer en la celda sin dañar la cantidad de irradiación, la energía luminosa.
6, el microscopio multifotónico también tiene muchas ventajas. Tales como resolución tridimensional, intrusión de profundidad, eficiencia de dispersión, luz de fondo, relación señal-ruido, control, etc., existen microscopios láser anteriores que no tienen o tienen características incomparables más allá.
El microscopio de barrido láser confocal multifotónico se ha extendido a diversos campos de investigación y aplicación. Es capaz de realizar observaciones tridimensionales no destructivas de muestras en su estado natural y puede mejorar la resolución y la relación señal-ruido del sistema. Utilizando el cambio de propiedades del material después de la excitación multifotónica, también es posible lograr un almacenamiento de datos de altura tridimensional y una microfabricación tridimensional en cualquier dirección, lo que tiene un alto valor de aplicación. Se puede creer que con el mayor desarrollo de maquinaria, materiales, tecnología láser y otras tecnologías relacionadas con la microscopía confocal multifotónica, el microscopio de barrido láser confocal multifotónico tendrá un mayor desarrollo y una aplicación más amplia.
Las desventajas son las siguientes:
1, solo imágenes de fluorescencia.
2, si la muestra incluye cromóforos que pueden absorber la luz de excitación, como pigmentos, la muestra puede sufrir daños térmicos.
3, la resolución se reduce ligeramente, aunque se puede mejorar mediante el uso simultáneo de apertura confocal, pero habrá pérdida de señal.
4. El costo de la microscopía de barrido multifotónica es alto debido a la limitación de los costosos láseres ultrarrápidos.
