Se mejoraron los beneficios de la microscopía multifotónica de barrido láser
El microscopio multifotónico de barrido láser es una mejora importante en la microscopía óptica, principalmente en la capacidad de observar la estructura profunda de células y tejidos vivos y fijos, y de obtener estructuras multicapa claras y nítidas del plano Z, es decir, cortes ópticos, a partir de los cuales Se puede construir una estructura sólida tridimensional de la muestra. La microscopía confocal utiliza una fuente de luz láser que se expande para llenar todo el plano focal posterior de la lente del objetivo y luego pasa a través del sistema de lentes de la lente del objetivo para converger en puntos muy pequeños en el plano focal de la muestra. Dependiendo de la apertura numérica de la lente del objetivo, el tamaño del diámetro del punto de iluminación brillante es de aproximadamente 0.25 ~ 0.8 μm y la profundidad es de aproximadamente 0.5 ~ 1,5 µm. El tamaño del punto confocal está determinado por el diseño del microscopio, la longitud de onda del láser, las características de la lente del objetivo, el estado de configuración de la unidad de escaneo y la naturaleza de la muestra. Los microscopios de campo tienen un gran rango de iluminación y profundidad de iluminación, mientras que los microscopios confocales concentran la iluminación en un único punto focal en el plano focal. La ventaja más básica de un microscopio confocal es la capacidad de realizar secciones ópticas finas de muestras fluorescentes gruesas (hasta 50 μm o más), con espesores de sección de aproximadamente 0,5 a 1,5 μm. Se puede obtener una serie de imágenes de sección óptica moviendo la muestra hacia arriba y hacia abajo con el motor paso a paso del eje Z del microscopio. La adquisición de información de la imagen se controla en el primer plano y no se ve interferida por señales emitidas desde otras ubicaciones de la muestra. Después de eliminar los efectos de la fluorescencia de fondo y aumentar la relación señal-ruido, el contraste y la resolución de la imagen confocal mejoran significativamente con respecto a las imágenes de fluorescencia iluminadas en campo convencionales. En muchos especímenes, muchos componentes estructurales intrincados se entrelazan para formar sistemas complejos, pero una vez que se pueden adquirir suficientes secciones ópticas, podemos reconstruirlas en tres dimensiones utilizando software. Este método experimental se ha utilizado ampliamente en la investigación biológica para dilucidar las complejas relaciones estructurales y funcionales entre células o tejidos.
