Introducción a las ventajas mejoradas de la microscopía multifoton de escaneo láser
El microscopio multiphoton de escaneo láser es una mejora significativa de la microscopía óptica, principalmente manifestada en la capacidad de observar estructuras profundas de células vivas, células fijas y tejidos, y obtener estructuras de plano Z múltiples claras y nítidas, a saber, las cortes ópticas, que pueden usarse para construir estructuras sólidas tripleas de especificaciones. El microscopio confocal utiliza una fuente de luz láser, que se expande para llenar todo el plano focal de la lente objetivo, y luego convergido en puntos muy pequeños en el plano focal de la muestra a través del sistema de lente de la lente objetivo. De acuerdo con la abertura numérica de la lente objetivo, el diámetro del punto de iluminación brillante se trata de 0. 25-0. 8 μ m, y la profundidad se trata de 0. 5-1. 5 μ m. El tamaño del punto confocal está determinado por el diseño del microscopio, la longitud de onda láser, las características objetivas, la configuración del estado de la unidad de escaneo y las propiedades de la muestra. El rango de iluminación y la profundidad de un microscopio de campo son grandes, mientras que la iluminación de un microscopio confocal se centra en un punto focal en el plano focal. La ventaja básica de la microscopía confocal es que puede realizar una seccionamiento óptico fino en muestras fluorescentes gruesas (hasta 5 0 μm o más), con un grosor de aproximadamente 0.5 a 1.5 μ m. La serie de imágenes de corte óptico se puede obtener moviendo la muestra hacia arriba y hacia abajo utilizando el motor paso a paso del eje Z del microscopio. La recopilación de información de la imagen se controla dentro del plano * *, sin interferencia de las señales emitidas desde otras posiciones en la muestra. Después de eliminar la influencia de la fluorescencia de fondo y aumentar la relación señal / ruido, el contraste y la resolución de las imágenes confocales mejoran significativamente en comparación con las imágenes tradicionales de fluorescencia de iluminación de campo. En muchos especímenes, los componentes estructurales intrincados se entrelazan para formar sistemas complejos, pero una vez que se pueden recopilar suficientes secciones ópticas, podemos usar el software para reconstruirlos en tres dimensiones. Este método experimental se ha utilizado ampliamente en la investigación biológica para dilucidar las complejas relaciones estructurales y funcionales entre células o tejidos.
