Introducción a los microscopios ópticos generales.
El microscopio es la herramienta principal para observar las células. Según las diferentes fuentes de luz, se pueden dividir en dos categorías: microscopios ópticos y microscopios electrónicos. El primero utiliza luz visible (el microscopio UV utiliza luz ultravioleta) como fuente de luz, mientras que el segundo utiliza un haz de electrones como fuente de luz. Los microscopios ópticos ordinarios y los microscopios confocales láser son ambos microscopios ópticos.
Los microscopios biológicos ordinarios se componen de tres partes, a saber: ① sistema de iluminación, que incluye fuente de luz y condensador; ② sistema de aumento óptico, que consta de lente objetivo y ocular, que es el cuerpo principal del microscopio. Para eliminar la aberración esférica y la aberración cromática, tanto el ocular como el objetivo están compuestos por un complejo compuesto por un grupo de lentes; ③ Dispositivo mecánico, utilizado para fijar materiales y facilitar la observación.
La claridad de una imagen microscópica depende no sólo del aumento, sino también de la resolución del microscopio. La resolución se refiere a la capacidad del microscopio (o del ojo humano a 25 cm de distancia del objetivo) para distinguir la distancia más pequeña entre objetos. El tamaño de la resolución se determina en función de la longitud de onda de la luz, la relación de apertura de la lente y el índice de refracción del medio, la fórmula se expresa como:
R=0.61λ/NANA =ｎsen/2
En la fórmula: n=índice de refracción del medio; =ángulo de apertura del espejo (el ángulo de apertura de la muestra con respecto a la apertura de la lente del objetivo), NA=apertura numérica. El ángulo del espejo es siempre inferior a 180 grados, por lo que el valor máximo de sina/2 debe ser inferior a 1.
El índice de refracción del vidrio utilizado para fabricar lentes ópticas es de 1,65 a 1,78. Cuanto más cercano sea el índice de refracción del medio utilizado al del vidrio, mejor. Para lentes de objetivo secos, el medio es aire y la relación de apertura de la lente es generalmente 0.05~0,95; para lentes de aceite, se utiliza aceite de cedro como medio y la relación de apertura de la lente puede ser cercana a 1,5.
La longitud de onda de la luz ordinaria es de 400~700 nm, por lo que el valor de resolución del microscopio no será inferior a 0,2 μm. La resolución del ojo humano es de 0,2 mm, por lo que el aumento máximo del diseño de microscopio general suele ser de 1000X.
