Ventajas mejoradas del microscopio multifotónico de barrido láser
El microscopio multifotónico de barrido láser es una mejora importante del microscopio óptico, que muestra principalmente que puede observar la estructura profunda de células vivas, células fijas y tejidos, y puede obtener una estructura de plano Z multicapa clara y nítida, es decir, cortes ópticos. , que se puede utilizar para construir la estructura sólida tridimensional de muestras. El microscopio confocal utiliza una fuente de luz láser, que llena todo el plano focal posterior de la lente del objetivo después de la expansión y luego pasa a través del sistema de lentes de la lente del objetivo para converger en puntos muy pequeños en el plano focal de la muestra. Según la apertura numérica de la lente del objetivo, el diámetro del punto de iluminación más brillante es de aproximadamente 0.25 ~ 0.8 μm y la profundidad es de aproximadamente 0.5 ~ 1,5 μ m .. El tamaño del foco de copolimerización depende del diseño del microscopio, la longitud de onda del láser, las características de la lente del objetivo, la configuración del estado de la unidad de escaneo y las propiedades de la muestra. El rango de iluminación y la profundidad de campo del microscopio son muy grandes, mientras que la iluminación del microscopio confocal se concentra en un * * foco en el plano focal. La ventaja más básica del microscopio confocal es que puede hacer cortes ópticos finos de muestras fluorescentes gruesas (que pueden alcanzar 50 μm o más), y el grosor de los cortes es de aproximadamente 0,5 a 1,5 μm. Se puede obtener una serie de imágenes de cortes ópticos moviendo la muestra hacia arriba y hacia abajo mediante el motor paso a paso del eje Z del microscopio. La adquisición de información de la imagen se controla en el primer plano y no se ve perturbada por señales procedentes de otras posiciones de la muestra. Después de eliminar la influencia de la fluorescencia de fondo y aumentar la relación señal-ruido, el contraste y la resolución de la imagen confocal obviamente mejoran en comparación con la imagen de fluorescencia de iluminación de campo tradicional. En muchos especímenes, muchos componentes estructurales intrincados están entrelazados para formar un sistema complejo, pero una vez que se pueden recolectar suficientes secciones ópticas, podemos reconstruirlas en tres dimensiones mediante software. Este método experimental se ha utilizado ampliamente en la investigación biológica para aclarar la compleja relación estructural y funcional entre células o tejidos.
