Cómo elegir el microscopio de fluorescencia adecuado
El microscopio de fluorescencia es un equipo de imágenes microscópicas estándar para laboratorios y departamentos de patología. Utiliza características de fluorescencia para la observación y la obtención de imágenes. Es ampliamente utilizado en biología celular, neurobiología, botánica, microbiología, patología, genética y otros campos. Las imágenes de fluorescencia tienen las ventajas de una alta sensibilidad y alta especificidad, y son muy adecuadas para la observación de la distribución de proteínas y orgánulos específicos en tejidos y células, el estudio de la colocalización y la interacción, el seguimiento de los procesos dinámicos de la vida, como los cambios en la concentración de iones. , etc.
Elección del microscopio
Los microscopios de fluorescencia se dividen principalmente en tres categorías: microscopios de fluorescencia verticales (adecuados para seccionamiento), microscopios de fluorescencia invertida (adecuados para células vivas, teniendo en cuenta el seccionamiento), microscopios de fluorescencia estereoscópicos (adecuados para muestras más grandes, como plantas, pez cebra (adulto/ embrión), medaka, órganos de ratón/rata, etc.).
Selección de cubos de filtros de fluorescencia
Además de considerar las longitudes de onda de excitación y emisión de las sondas fluorescentes, la selección de bloques de filtros también debe tener en cuenta si hay excitación no específica y color cruzado para muestras etiquetadas con varios colores. En el experimento, intentaremos elegir la longitud de onda más cercana al pico de excitación para la excitación, y el rango de recepción debe incluir el pico de emisión. Por ejemplo, el pico de excitación de Alexa Fluor 488 es de 500 nm y se puede seleccionar un filtro de excitación 480/40 en un microscopio de fluorescencia. Los cubos de filtro de fluorescencia comúnmente utilizados en los microscopios de fluorescencia se pueden dividir en dos tipos: paso largo (LP para abreviar) y paso de banda (BP para abreviar), que también deben seleccionarse según las necesidades.
Elección de la fuente de luz fluorescente
Las fuentes de luz fluorescente comúnmente utilizadas en la actualidad incluyen lámparas de mercurio, lámparas de halogenuros metálicos y fuentes de luz LED que se han desarrollado rápidamente en los últimos años. El espectro de la fuente de luz fluorescente es continuo y discontinuo, y la energía será diferente en diferentes bandas. Debido a su banda espectral relativamente estrecha, salida de energía más estable, larga vida útil, seguridad y protección ambiental y muchas otras ventajas, la fuente de luz LED se está convirtiendo gradualmente en la principal fuente de luz del microscopio de fluorescencia.
microscopio confocal
En la observación del microscopio de fluorescencia tradicional, debido a la superposición de sustancias marcadoras fluorescentes y estructuras de autofluorescencia, se combinan estrechamente, mientras que la lente del objetivo del microscopio de epifluorescencia tradicional no solo recoge la luz del plano focal, sino que también recoge la luz dispersa por encima y por debajo del plano focal, lo que resulta en una resolución y contraste de imagen muy reducidos.
Las imágenes confocales resuelven este problema al detectar solo la parte de la luz reflejada desde el plano focal. La fuente de luz pasa a través de un agujero de alfiler para formar un punto de luz pequeño y fino en el plano focal. La luz emitida desde el plano focal es recogida por la lente del objetivo. La mayor parte de la fluorescencia emitida desde el punto por encima o por debajo del plano focal de la lente del objetivo no puede converger en el pequeño orificio. Solo la fluorescencia ubicada en el plano focal y una pequeña parte de la fluorescencia fuera de foco pueden pasar a través del orificio, mientras que los haces de luz fuera del plano focal convergen en la parte delantera o trasera de la placa del orificio y no pueden ingresar al detector a través de el agujero de alfiler La imagen detectada es la imagen del plano focal, por lo que la calidad de la imagen final mejora considerablemente.
Debido a las ventajas y la practicidad de las funciones del microscopio confocal de barrido láser, el microscopio confocal es un asistente experimental indispensable en el campo de la biología celular de alta precisión, la botánica y la investigación celular. Al mismo tiempo, en el futuro centro de investigación científica, será la herramienta de investigación científica más básica y central.
