En qué se diferencia la microscopía de fluorescencia de la microscopía láser confocal
microscopio de fluorescencia
1. Un microscopio de fluorescencia utiliza luz ultravioleta como fuente de luz para iluminar el objeto que se está inspeccionando y hacerlo emitir fluorescencia, y luego observar la forma y ubicación del objeto bajo el microscopio. La microscopía de fluorescencia se utiliza para estudiar la absorción y el transporte de sustancias dentro de las células, así como la distribución y posición de sustancias químicas. Algunas sustancias de las células, como la clorofila, pueden volverse fluorescentes después de ser irradiadas con rayos ultravioleta; Algunas sustancias por sí mismas no pueden emitir fluorescencia, pero si se tiñen con tintes fluorescentes o anticuerpos fluorescentes, pueden emitir fluorescencia después de la irradiación con rayos ultravioleta. La microscopía de fluorescencia es una de las herramientas para la investigación cualitativa y cuantitativa de este tipo de sustancias.
2. Principio del microscopio de fluorescencia:
(A) Fuente de luz: La fuente de luz irradia luz de varias longitudes de onda (desde ultravioleta hasta infrarroja).
(B) Fuente de luz del filtro de excitación: transmite luz de una longitud de onda específica que puede hacer que la muestra emita fluorescencia, mientras bloquea la luz que es inútil para estimular la fluorescencia.
(C) Muestras fluorescentes: generalmente teñidas con pigmentos fluorescentes.
(D) Filtro de bloqueo: bloquea la luz de excitación que no es absorbida por la muestra y transmite fluorescencia de forma selectiva. Algunas longitudes de onda en la fluorescencia también se transmiten selectivamente. Un microscopio que utiliza luz ultravioleta como fuente de luz para hacer que el objeto iluminado emita fluorescencia. El microscopio electrónico fue ensamblado por primera vez en 1931 en Berlín, Alemania, por Knorr y Hallowska. Este microscopio utiliza un haz de electrones de alta velocidad en lugar de un haz de luz. Dado que la longitud de onda del flujo de electrones es mucho más corta que la de la luz, el aumento del microscopio electrónico puede alcanzar 800,000 veces y el límite mínimo de resolución es de 0,2 nanómetros. El microscopio electrónico de barrido, que comenzó a utilizarse en 1963, permite ver las diminutas estructuras de la superficie de los objetos.
3. Ámbito de aplicación: Se utiliza para ampliar imágenes de objetos pequeños. Generalmente utilizado en la observación de biología, medicina, partículas microscópicas, etc.
microscopio confocal
1. El microscopio confocal agrega una semilente semirreflectante a la trayectoria óptica de la luz reflejada, que refracta la luz reflejada que ha pasado a través de la lente en otras direcciones. Hay un deflector con un orificio en su foco, y el orificio está ubicado. En el punto focal, detrás del deflector, hay un tubo fotomultiplicador. Se puede imaginar que la luz reflejada antes y después del foco de luz de detección pasa a través de este sistema confocal y no puede enfocarse en el pequeño orificio y será bloqueada por el deflector. Entonces, lo que mide el fotómetro es la intensidad de la luz reflejada en el foco.
2. Principio: Los microscopios ópticos tradicionales utilizan fuentes de luz de campo y la imagen de cada punto de la muestra se verá interferida por la difracción o la luz dispersa de puntos adyacentes; Los microscopios confocales de barrido láser utilizan rayos láser para formar fuentes de luz puntuales a través de orificios luminosos para iluminar el interior de la muestra. Se escanea cada punto del plano focal y se obtiene una imagen del punto iluminado en la muestra en el orificio de detección, que se recibe punto por punto o línea por línea por el tubo fotomultiplicador (PMT) o el dispositivo de acoplamiento en frío (cCCD) detrás de la detección. agujero de alfiler, y se forma rápidamente una imagen fluorescente en la pantalla del monitor de la computadora. El orificio de iluminación y el orificio de detección están conjugados con respecto al plano focal de la lente del objetivo. Los puntos en el plano focal se enfocan al mismo tiempo en el orificio de iluminación y en el orificio de emisión. Los puntos fuera del plano focal no se visualizarán en el orificio de detección. Esto se obtiene con imágenes confocales, que son secciones transversales ópticas de muestras, superando las deficiencias de las imágenes borrosas en los microscopios comunes.
3. Campos de aplicación: medicina, investigación científica animal y vegetal, bioquímica, bacteriología, biología celular, embriología de tejidos, ciencia de los alimentos, genética, farmacología, fisiología, óptica, patología, botánica, neurociencia, biología marina y ciencia de materiales, ciencia electrónica. , mecánica, geología del petróleo, mineralogía.
