Funcionamiento básico del microscopio de fluorescencia
a. Apague las luces de la habitación y encienda la lámpara de mercurio del microscopio;
b. Seleccione el filtro correspondiente según la fluoresceína marcada por la muestra;
C. Coloque la muestra y encuentre un campo de visión adecuado;
d. Si necesita tomar fotografías, confirme que la película en color está instalada en la cámara;
mi. Encienda el dispositivo Selfie, seleccione el engranaje manual, generalmente la velocidad de disparo es dentro de 0.5-10 segundos;
F. Después del uso, apague toda la energía y haga un registro de uso. el
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3. Método de grabación de imagen de fluorescencia
La imagen de fluorescencia vista por el microscopio de fluorescencia tiene tanto características morfológicas como color y brillo de fluorescencia. Al juzgar los resultados, los dos deben combinarse para obtener un juicio integral. Los resultados se registran en base a indicadores subjetivos, es decir, observación visual por parte de los trabajadores. Como observación cualitativa general, básicamente confiable. Con el desarrollo de la tecnología y la ciencia, se utilizan indicadores objetivos para registrar los resultados del juicio en diversos grados, como espectrofotómetros de células, analizadores de imágenes y otros instrumentos. Sin embargo, los resultados registrados por estos instrumentos también deben combinarse con juicios subjetivos. el
La fotografía con microscopio de fluorescencia es muy necesaria para registrar imágenes de fluorescencia. Dado que la fluorescencia es fácil de desvanecer y debilitarse, es necesario registrar los resultados en tiempo real. El método es básicamente el mismo que el de la microfotografía ordinaria. Solo necesita usar una película fotosensible de alta velocidad. Debido a que la luz ultravioleta tiene un fuerte efecto en la extinción de la fluorescencia, como los marcadores FITC, el brillo de la fluorescencia disminuirá en un 50 por ciento cuando se irradie con luz ultravioleta durante 30 s. Por lo tanto, si la velocidad de exposición es demasiado lenta, no se puede tomar la imagen fluorescente. Los microscopios de fluorescencia de investigación general tienen dispositivos de sistemas de fotomicrografía semiautomáticos o completamente automáticos. el
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4. Precauciones para el uso de microscopía de fluorescencia
a. Opere estrictamente de acuerdo con los requisitos de las instrucciones de fábrica del microscopio de fluorescencia y no cambie el programa a voluntad. el
b. La inspección debe llevarse a cabo en una habitación oscura. Después de ingresar al cuarto oscuro, conecte la fuente de alimentación y encienda la lámpara de mercurio de ultra alta presión durante 5-15 minutos. Después de que la fuerte luz de la fuente de luz se estabilice, los ojos se adaptan completamente al cuarto oscuro y luego comienzan a observar la muestra. el
C. Para evitar el daño de los rayos ultravioleta a los ojos, use gafas protectoras cuando ajuste la fuente de luz. el
d. El tiempo de inspección es preferiblemente 1-2 horas cada vez. Si excede los 90 minutos, la intensidad luminosa de la lámpara de mercurio de ultra alta presión disminuirá gradualmente y la fluorescencia se debilitará; después de irradiar la muestra con luz ultravioleta durante 3-5 minutos, la fluorescencia también se debilitará significativamente; por lo tanto, no debe exceder las 2-3 horas como máximo. . el
mi. La vida útil de la fuente de luz del microscopio fluorescente es limitada y las muestras se deben controlar de forma centralizada para ahorrar tiempo y proteger la fuente de luz. Cuando hace calor, se deben agregar ventiladores para disipar el calor, y las bombillas nuevas se deben registrar desde el comienzo de su tiempo de uso. Cuando quiera volver a utilizarla después de que la lámpara se haya apagado, debe esperar a que la bombilla se haya enfriado lo suficiente antes de encenderla. Evite encender la fuente de luz varias veces al día. el
F. Observe la muestra inmediatamente después de la tinción, ya que la fluorescencia se debilitará gradualmente con el tiempo. Si la muestra se almacena en una bolsa de plástico de polietileno a 4 grados, el tiempo de debilitamiento de la fluorescencia se puede retrasar y se puede evitar que el agente de montaje se evapore. el
gramo. Estándar de juicio del brillo de la fluorescencia: generalmente se divide en cuatro niveles, es decir, "-" significa que no se puede ver fluorescencia o que se puede ver una fluorescencia débil. "más" significa que solo se vio una fluorescencia claramente visible. "plus plus" significa que se ve una fluorescencia brillante. "plus plus plus" significa fluorescencia brillante visible.
