Diferencias y características del microscopio de fluorescencia y del microscopio óptico ordinario.
El microscopio de fluorescencia y el microscopio óptico ordinario son diferentes, no es a través de la iluminación de la fuente de luz ordinaria para observar la muestra, sino el uso de una cierta longitud de onda de luz (generalmente luz ultravioleta, luz azul-violeta) para excitar el material fluorescente dentro de la muestra. bajo el microscopio, de modo que la fluorescencia de la fuente de luz del microscopio de fluorescencia no juega una iluminación directa, sino como una especie de excitación del material fluorescente dentro de la muestra de la fuente de energía. La razón por la que podemos observar la muestra no se debe a la iluminación de la fuente de luz, sino al fenómeno de fluorescencia que presenta el material fluorescente en la muestra después de absorber la energía luminosa de excitación. Se puede ver que las características del microscopio de fluorescencia, principalmente su fuente de luz, pueden suministrar una gran cantidad de rangos de longitud de onda específicos de la luz de excitación, de modo que el material fluorescente dentro de la muestra examinada pueda obtener la intensidad necesaria de la luz de excitación. Al mismo tiempo, el microscopio de fluorescencia debe disponer de un sistema de filtrado correspondiente. El microscopio de fluorescencia es la herramienta básica para la histoquímica de fluorescencia. Se compone de una fuente de luz de presión ultraalta, un sistema de filtro (incluida la placa de filtro de excitación y supresión), un sistema óptico y un sistema fotográfico y otros componentes importantes; consiste en el uso de una determinada longitud de onda de luz para estimular la muestra para que emita fluorescencia.
1. La forma de excitación de la fluorescencia: según el rango de longitud de onda de la luz se divide en el método de excitación UV (usando iluminación ultravioleta) y el método de excitación BV (usando luz azul violeta). Dos tipos de métodos de excitación UV son más cortos que 400 nm cerca de la luz ultravioleta para excitación. No hay luz de excitación visible en este método, por lo que la fluorescencia observada muestra la fluorescencia inherente del tinte y es fácil distinguir la fluorescencia específica de la muestra de la autofluorescencia del tejido de fondo.
2. Método de excitación BV: el método se centra en 404 nm, 434 nm de luz ultravioleta a luz azul para la excitación. Este método utiliza luz azul para irradiar la muestra, por lo que el filtro de corte del sistema de observación de fluorescencia debe usar un filtro que pueda bloquear completamente la luz azul y que pueda pasar adecuadamente la fluorescencia verde y amarilla deseada. Pigmentos fluorescentes para el método de anticuerpos fluorescentes. Dado que la longitud de onda de máxima absorción de la luz de excitación y la longitud de onda de máxima emisión de fluorescencia están cercanas entre sí, los filtros utilizados en el método de excitación BV deben ser filtros de corte agudo. Este método utiliza luz azul como luz de excitación, por lo que la eficiencia de absorción del fluorocromo es mayor y se puede obtener una imagen más brillante. La desventaja es que no se puede ver la fluorescencia por debajo de 500 nm y por encima de 500 nm toda la imagen aparece amarilla. En el método de anticuerpos fluorescentes, la mayor parte de la especificidad se juzga por el color único del fluorocromo, por lo que las desventajas del método de excitación BV descrito anteriormente tienden a ser extremadamente influyentes cuando se habla de especificidad sutil.
