Principios experimentales del método de recuento directo de microscopía microbiana.
El conteo directo bajo un microscopio usando un hemocitómetro es un método comúnmente utilizado para contar microorganismos. La ventaja de este método es que es intuitivo y rápido. Coloque la suspensión bacteriana adecuadamente diluida (o suspensión de esporas) en la cámara de conteo entre el portaobjetos y el cubreobjetos del hemocitómetro y cuente bajo un microscopio. Dado que el volumen de la cámara de recuento es fijo (0.1 mm2), se puede convertir en el número total de microorganismos por unidad de volumen en función del número de microorganismos observados bajo el microscopio. Dado que este método cuenta el número total de bacterias vivas y muertas, también se le llama método de recuento bacteriano total.
Un hemocitómetro suele ser un portaobjetos especial con cuatro ranuras que forman tres plataformas. La plataforma intermedia está dividida en dos mitades por una corta ranura horizontal. Hay una cuadrícula cuadrada grabada en la plataforma a cada lado. Cada cuadrícula se divide en nueve cuadrados grandes. La gran plaza del medio es la sala de recuento. El recuento de microorganismos se realiza en la cámara de recuento. La estructura del hemocitómetro se muestra en la Figura Ⅷ-1.
La escala de la cámara de recuento suele tener dos especificaciones. Uno es un cuadrado grande dividido en 16 cuadrados medianos y cada cuadrado mediano está dividido en 25 cuadrados pequeños (Figura Ⅷ-2); el otro es un gran cuadrado. La cuadrícula está dividida en 25 cuadrados medianos y cada cuadrado mediano está dividido en 16 cuadrados pequeños (Figura VIII-1, C). Pero no importa qué tipo de tablero de conteo sea, el número de cuadrados pequeños en cada cuadrado grande es el mismo, es decir, 16 × 25=400 cuadrados pequeños, como se muestra en la Figura Ⅷ-2.
La longitud del lado de cada cuadrado grande es 1 mm, por lo que el área de cada cuadrado grande es 1 mm2. Una vez cubierto el cubreobjetos, la altura entre el portaobjetos y el cubreobjetos es 0.1 mm, por lo que el volumen de la cámara de recuento es 0.1 mm3.
Al contar, generalmente cuente el número total de bacterias en cinco cuadrados medianos, luego encuentre el valor promedio de cada cuadrado del medio y luego multiplique por 16 o 25 para obtener el número total de bacterias en un cuadrado grande y luego calcule. Convierta a Número total de bacterias en 1 ml de solución bacteriana.
