Mejora de los beneficios de la microscopía de barrido láser multifotónica
La microscopía multifotónica de barrido láser es una mejora importante con respecto a la microscopía óptica. Puede observar la estructura profunda de células vivas, células fijas y tejidos, y puede obtener estructuras de plano Z multicapa claras y nítidas, es decir, secciones ópticas, a partir de las cuales puede construir la estructura sólida tridimensional de la muestra. La microscopía confocal utiliza una fuente de luz láser que, después de la expansión, llena todo el plano focal posterior de la lente del objetivo y luego pasa a través del sistema de lentes de la lente del objetivo para converger en un punto muy pequeño en el plano focal de la muestra. Dependiendo de la apertura numérica de la lente del objetivo, el diámetro del punto de iluminación más brillante es de aproximadamente 0.25 ~ 0.8 μm, y la profundidad es de aproximadamente 0.5 ~ 1,5 μm . El tamaño del punto confocal depende del diseño del microscopio, la longitud de onda del láser, las características de la lente del objetivo, la configuración del estado de la unidad de escaneo y las propiedades de la muestra. El rango de iluminación y la profundidad de iluminación de un microscopio de campo son grandes, mientras que la iluminación de un microscopio confocal se concentra en un foco preciso en el plano focal. La ventaja más básica de la microscopía confocal es que puede realizar cortes ópticos finos de muestras fluorescentes gruesas (que pueden alcanzar 50 μm o más), y el grosor de los cortes es de aproximadamente 0,5 a 1,5 μm. Se pueden obtener imágenes de secciones ópticas en serie moviendo la muestra hacia arriba y hacia abajo utilizando un sofisticado motor paso a paso del eje Z del microscopio. La recopilación de información de la imagen se controla en un plano preciso sin ser interferida por señales emitidas desde otras ubicaciones de la muestra. Después de eliminar la influencia de la fluorescencia de fondo y aumentar la relación señal-ruido, el contraste y la resolución de las imágenes confocales mejoran significativamente en comparación con las imágenes fluorescentes tradicionales iluminadas en campo. En muchos especímenes, muchos componentes estructurales intrincados están entrelazados para formar sistemas complejos, pero una vez que se puedan recolectar suficientes secciones ópticas, podemos reconstruirlas en tres dimensiones mediante software. Este método experimental se ha utilizado ampliamente en la investigación biológica para dilucidar las complejas relaciones estructurales y funcionales entre células o tejidos.
