Mejora de los beneficios de la microscopía multifotónica de barrido láser
La microscopía multifotónica de barrido láser es una mejora importante con respecto a la microscopía óptica. Puede observar la estructura profunda de células vivas, células fijas y tejidos, y puede obtener estructuras de plano Z multicapa claras y nítidas, es decir, secciones ópticas, a partir de las cuales puede construir la estructura sólida tridimensional de la muestra. La microscopía confocal utiliza una fuente de luz láser que, después de la expansión, llena todo el plano focal posterior de la lente del objetivo y luego pasa a través del sistema de lentes de la lente del objetivo para converger en un punto muy pequeño en el plano focal de la muestra. Dependiendo de la apertura numérica de la lente del objetivo, el diámetro del punto de iluminación más brillante es de aproximadamente 0.25 ~ 0.8 μm, y la profundidad es de aproximadamente 0.5 ~ 1,5 μm . El tamaño del punto confocal depende del diseño del microscopio, la longitud de onda del láser, las características de la lente del objetivo, la configuración del estado de la unidad de escaneo y las propiedades de la muestra. La microscopía de campo tiene un gran rango de iluminación y profundidad, mientras que la microscopía confocal tiene una iluminación enfocada en un punto focal en el plano focal. La ventaja más básica de la microscopía confocal es que puede realizar cortes ópticos finos de muestras fluorescentes gruesas (que pueden alcanzar 50 μm o más), y el espesor de las secciones es de aproximadamente 0,5 a 1,5 μm. Se puede obtener una serie de imágenes de sección óptica moviendo la muestra hacia arriba y hacia abajo usando el motor paso a paso del eje Z del microscopio. La adquisición de información de imágenes se controla dentro del avión y no será interferida por señales emitidas desde otras ubicaciones de la muestra. Después de eliminar la influencia de la fluorescencia de fondo y aumentar la relación señal-ruido, el contraste y la resolución de las imágenes confocales mejoran significativamente en comparación con las imágenes fluorescentes tradicionales iluminadas en campo. En muchos especímenes, muchos componentes estructurales intrincados están entrelazados para formar sistemas complejos, pero una vez que se puedan recolectar suficientes secciones ópticas, podemos reconstruirlas en tres dimensiones mediante software. Este método experimental se ha utilizado ampliamente en la investigación biológica para dilucidar las complejas relaciones estructurales y funcionales entre células o tejidos.
