Determinación del número de microorganismos: ¡método de conteo directo microscópico!
Fundamental
El método de conteo directo microscópico es un método simple, rápido e intuitivo que consiste en colocar una pequeña cantidad de la suspensión de la muestra a analizar en un portaobjetos de vidrio especial (también conocido como contador de bacterias) con un área y volumen definidos, y contar directamente debajo. un microscopio. En la actualidad, los contadores de bacterias comúnmente utilizados en el país y en el extranjero incluyen: tablero de recuento de células sanguíneas, contador de bacterias Peteroff-Hauser y contador de bacterias Hawksley, etc. Todos pueden usarse para contar suspensiones como levaduras, bacterias y esporas de moho, y Los principios básicos son los mismos. Los dos últimos contadores de bacterias tienen un volumen total de 0.02 mm3 después de cubrirlos con un cubreobjetos, y la distancia entre el cubreobjetos y el portaobjetos es de solo 0,02 mm, por lo que las células pequeñas como las Las bacterias se pueden observar y contar con un objetivo de inmersión en aceite. Además de utilizar estos contadores de bacterias, también existe un método de estimación que consiste en observar directamente la relación entre el área de frotis y el área del campo visual bajo un microscopio. Este método se utiliza generalmente para el examen bacteriológico de la leche. La ventaja del método de conteo directo mediante microscopio es que es intuitivo, rápido y fácil de operar. Pero la desventaja de este método es que los resultados medidos suelen ser la suma de bacterias vivas y muertas. En la actualidad, existen algunos métodos para superar esta deficiencia, como combinar bacterias vivas que tiñen cultivos en microcámaras (tiempo corto) y agregar inhibidores de la división celular para lograr el propósito de contar solo bacterias vivas.
En este experimento, se utilizó un hemocitómetro como ejemplo para realizar el conteo directo bajo un microscopio. Para conocer los métodos de uso de los otros dos contadores de bacterias, consulte las instrucciones de cada fabricante. El conteo directo bajo un microscopio con un hemocitómetro es un método de conteo microbiano comúnmente utilizado. El tablero de conteo es un portaobjetos de vidrio especialmente diseñado, en el que cuatro ranuras forman tres plataformas; la plataforma más ancha en el medio está dividida en dos mitades por una ranura horizontal corta, y cada lado de la plataforma está revestido con una rejilla. Cada cuadrícula está dividida en nueve cuadrados grandes, y el cuadrado grande del medio es la cámara de conteo. La escala de la sala de conteo generalmente tiene dos especificaciones: una es que un cuadrado grande se divide en 25 cuadrados medianos y cada cuadrado mediano se divide en 16 cuadrados pequeños; la otra es que un cuadrado grande se divide en 16 cuadrados del medio, y cada cuadrado del medio se divide en 25 cuadrados pequeños, pero no importa qué tipo de tablero de conteo, hay 400 cuadrados pequeños en cada cuadrado grande. La longitud del lado de cada cuadrado grande es 1 mm, y luego el área de cada cuadrado grande es 1 mm 2. Después de cubrir el cubreobjetos, la altura entre el cubreobjetos y el portaobjetos es de 0,1 mm, por lo que el volumen del cámara de recuento es de 0,1 mm (una diezmilésima de mililitro).
