Describir en detalle los pasos y métodos de selección de sondas fluorescentes para microscopía confocal.
En experimentos con microscopios confocales, algunos indicadores experimentales pueden detectarse utilizando la autofluorescencia de la propia muestra o sustancias exógenas, pero la mayoría de las sustancias a analizar no tienen fluorescencia medible y deben marcarse con sondas fluorescentes. Tiene una señal fluorescente medible. Entonces, ¿cómo elegir sondas fluorescentes para microscopía confocal?
1. Determinar los indicadores a probar según el propósito del experimento
Una vez que se determina el índice de detección, también se determina el rango de selección de sondas fluorescentes. Puede verse que la elección de qué sonda fluorescente usar en el experimento está determinada por el propósito del experimento. Por ejemplo, si el propósito del experimento es estudiar los cambios de los iones de calcio en los cardiomiocitos cuando ocurre la fibrilación auricular, se puede determinar que la sustancia a probar son los iones de calcio en los cardiomiocitos, y el rango de selección de las sondas fluorescentes se limita a sondas de iones de calcio que pueden marcar células vivas. Aguja.
2. Determinar el rango de sondas fluorescentes disponibles
Para nuevas sustancias experimentales o indicadores, si el propósito del experimento no es explorar nuevas sondas fluorescentes, puede optar por aplicar sondas maduras y métodos de etiquetado. El tipo o rango de sondas fluorescentes que pueden marcar la sustancia que se va a analizar se puede determinar mediante la búsqueda de literatura autorizada o catálogos de productos de empresas de reactivos conocidas en el país y en el extranjero.
3. Investigar si las características de la sonda fluorescente cumplen con los requisitos para la preparación de muestras fluorescentes
Las características de las sondas fluorescentes afectan directamente el etiquetado de las muestras y los resultados experimentales. Por lo tanto, antes de seleccionar sondas fluorescentes y etiquetar muestras en el experimento, es necesario comprender completamente sus características de fluorescencia. Las características de las sondas fluorescentes a investigar incluyen:
1. Características de reacción de sondas de luz y muestras.
2. Sensibilidad e intensidad de fluorescencia de las sondas fluorescentes
3. Propiedades espectrales de muestras marcadas con sondas fluorescentes
4. Estabilidad de la fluorescencia
5. Interacción entre fluorescencia múltiple en la muestra
