Parámetros técnicos del microscopio confocal
1 resolución
La distribución de la función de dispersión de puntos del sistema del microscopio confocal es igual a la convolución de la lente del objetivo y la distribución de energía de la imagen de puntos. En el caso de la misma lente objetivo, su resolución lateral (plano xy) es 1,4 veces mayor que la de los microscopios ópticos tradicionales, alcanzando 0.4λ/NA. Por ejemplo, la resolución del TcS-NT de Leica es 0,18 μm. Por el principio del microscopio confocal, sabemos que la configuración del orificio de alfiler en el detector no solo suprime eficazmente la interferencia de la imagen del punto desenfocado con la imagen del plano de detección, sino que también suprime la interferencia de la no detección. punto en el plano cuasi-foco al punto de detección, lo que mejora en gran medida la resolución de la imagen. Además, para lograr una resolución extrema, los sistemas de microscopios confocales deben estar equipados con una platina a prueba de vibraciones.
2 Sensibilidad
Los microscopios ópticos tradicionales a menudo están equipados con cámaras CCD para recopilar imágenes, pero debido a la sensibilidad relativamente baja de los CCD, no se puede detectar la luz de baja iluminancia, como la fluorescencia, por lo que los tubos fotomultiplicadores se utilizan generalmente como elementos de detección en los sistemas de microscopio confocal. Mucho más que CCD, también puede mostrar una alta sensibilidad a señales fluorescentes débiles.
3 Resolución horizontal
Los sistemas de microscopía confocal revelan mayor detalle en imágenes ampliadas que la microscopía de luz convencional. El aumento mencionado aquí no se refiere al aumento físico, sino que se refiere a los detalles morfológicos de la imagen mostrada por el microscopio confocal bajo la misma condición de aumento de la lente del objetivo, que es difícil de ver bajo el microscopio óptico tradicional, por lo que la imagen es más claro y más sutil. La resolución horizontal es más alta.
4 contraste
Dado que la luz de iluminación del objeto es solo un punto de luz enfocado muy pequeño en el escaneo, y el brillo y la relación señal-ruido son altos, la luz de la señal es más fuerte que otros puntos del objeto. En el plano de la imagen, el detector puntual solo puede recibir luz que pasa a través del agujero de alfiler, mientras que la luz perdida de otras partes del objeto se filtra porque no se puede enfocar en el agujero de alfiler confocal. Esto da como resultado imágenes de mayor contraste de muestras obtenidas con microscopios de barrido confocales que con microscopios convencionales.
