Biomicroscopia sobre el volumen de bloques de tejido
Microscopía biológica Hasta ahora, la fijación en frío, la sección ultrafina congelada y la liofilización son métodos de rutina para microsecciones de rayos X de células y tejidos. Los detalles de este método se explican a continuación:
Para microscopios biológicos con condensador, el condensador se puede mover hacia arriba y hacia abajo para moderar el brillo, y la apertura de la luz variable también se puede cambiar para lograr un brillo moderado de 9b. Si la luz es soleada, el condensador puede elevarse adecuadamente y la apertura de la fuente de luz variable puede ampliarse adecuadamente. Si la luz es demasiado fuerte, la lente del condensador se puede bajar de manera adecuada y la apertura de la luz de intersección se puede reducir de manera adecuada. Si todavía te sientes deslumbrante en este caso, puedes elegir un filtro apropiado y colocarlo en el soporte debajo del condensador. Este roble podrá obtener el brillo que le satisfaga. Por supuesto, ajustar las posiciones superior e inferior del condensador, ajustar el tamaño de apertura de la lectura óptica variable y seleccionar un filtro adecuado requiere cierto período de práctica para ganar experiencia.
Un tema muy importante en microscopía biológica es que en el proceso de muestreo y separación de células, después de la liofilización y la incrustación de resina (FD), después de la congelación de agregados ultrafinos, y después de la liofilización, el contenido de 65 elementos en cada parte debe manejarse con cuidado. Las células a analizar no pueden dañarse. Porque el microanálisis de rayos X no solo implica muchos pasos, sino que también cuesta mucho. Si las células analizadas son células dañadas o células muertas después de un largo tiempo y un procesamiento de varios pasos, es muy lamentable sacar conclusiones erróneas. Por ejemplo, los cardiomiocitos separados por tratamiento con colagenasa tienen dos formas, una es de varilla larga
Biomicroscopia La cantidad y distribución de electrolitos en estos dos tipos de células son bastante diferentes. El Na es muy alto y el K es muy bajo en los cardiomiocitos circulares, y la concentración de Ca en los nematodos es muy alta. Después de verificar con otros métodos de análisis, se demuestra que el alto Na y el bajo K de las células redondas y el alto Ca en las mitocondrias se deben al daño de la membrana celular durante el proceso de separación celular. El método de fijación en frío de células y tejidos generalmente consiste en adoptar primero el enfriamiento y la fijación, y luego almacenarlos en nitrógeno líquido. La fijación de enfriamiento es muy importante para el efecto de conservación. Las células vivas o los tejidos frescos son ricos en agua. Al apagar, las partes de las células o tejidos que están en contacto directo con el refrigerante triturado (especialmente cuando se apaga con nitrógeno líquido) a menudo se congelan y fijan primero, formando así una "cáscara", lo que dificulta Las partes centrales de las celdas fueron triturado y fijado en frío. Por lo tanto, cuando se realiza un análisis de microárea de línea X, a menudo se encuentra que hay cristales de hielo en el centro de las celdas más grandes. Para evitar que esto suceda, se utiliza como refrigerante fragmentado una sustancia con un punto de fusión superior al del nitrógeno líquido pero inferior al del 806c. Hay muchas de estas sustancias, pero la más fácil de obtener, la más barata es el propano concentrado (punto de ebullición - 42.120c, punto de fusión - 187.10c, peso molecular 44.1) y la velocidad de enfriamiento es la más rápida. . Pero su desventaja es que es inflamable.
El microscopio biológico puede colocar la fibra muscular en un bastidor especial, de modo que cuando la contracción de la fibra muscular alcance una determinada fase y deba repararse, inicie inmediatamente la boquilla para rociar propano líquido a la fibra muscular para apagarla y repararla. Luego se sacaron las fibras musculares junto con el marco y se pusieron en nitrógeno líquido. Si fija células sanguíneas o células aisladas, primero concentre las células mediante centrifugación a baja velocidad, transfiéralas a un vial de plata con buena conductividad térmica, coloque el vial en propano líquido y congele para la fijación. Al fijar el páncreas de rata en el laboratorio de Hall, los dos bloques de acero se enfriaron previamente con helio líquido (o nitrógeno líquido), y los dos bloques de cobre se sujetaron con pinzas y se colocaron en la parte delantera y trasera del páncreas para apagar y fijar. el páncreas Los tejidos o las células se pueden almacenar en nitrógeno líquido para el almacenamiento a largo plazo después del enfriamiento rápido y la fijación.
Microscopía biológica Además del método de sección ultrafina congelada más respetado actualmente, aquí hay otra técnica de deposición utilizada por los científicos. Se agrega una sustancia para formar un sedimento con el componente a analizar para inmovilizarlo antes del análisis, y luego se analiza el sedimento. Por ejemplo, las personas a menudo usan oxalato y piroantimonato para depositar calcio en las células musculares. El primero no es suficientemente sensible a la baja concentración de Ca en el citoplasma; El piroantimonato es más sensible y puede formar depósitos densos en electrones con Ca libre en el cerebro, pero el piroantimonato no es compatible con el sodio, el manganeso, el bario y el hierro. También se forman depósitos y son menos específicos. El proceso de preparación de la muestra es similar a la preparación de muestras de secciones ultrafinas de microscopio electrónico de transmisión ordinario, la diferencia es que se fijó piroantimonato de potasio al 3 por ciento (solución salina tamponada con fosfato, pH 7,6) durante 6 horas antes de la fijación, y en las secciones ultrafinas de músculo teñidas, Se observaron depósitos negros en las líneas medias de las bandas A y 2 de cada sarcómero, y se usaron secciones no teñidas para microanálisis de rayos X. Se usó tetrahidrocloruro de diaminobencidina (DAB) para precipitar sustancias que contienen hemo, etc. La combinación de reacción de precipitación histoquímica y puente de microdiferenciación de rayos X se puede considerar en laboratorios que no tienen condiciones de sección ultrafina congelada. Semicuantitativo se puede hacer de acuerdo a la altura de los picos de los elementos a analizar
