Ventajas de las mejoras en los microscopios multifotónicos de barrido láser
El microscopio multifotónico de barrido láser es una mejora significativa de la microscopía óptica, que se manifiesta principalmente en la capacidad de observar estructuras profundas de células vivas, células fijas y tejidos, y obtener estructuras claras y nítidas de múltiples-capa Z-, es decir, cortes ópticos, que se pueden utilizar para construir estructuras sólidas tridimensionales-de muestras. El microscopio confocal utiliza una fuente de luz láser, que se expande para llenar todo el plano focal de la lente del objetivo y luego converge en puntos muy pequeños en el plano focal de la muestra a través del sistema de lentes de la lente del objetivo. Según la apertura numérica de la lente del objetivo, el diámetro del punto de iluminación brillante es de aproximadamente 0,25-0,8 μ m y la profundidad es de aproximadamente 0,5-1,5 μ m. El tamaño del punto confocal está determinado por el diseño del microscopio, la longitud de onda del láser, las características del objetivo, la configuración del estado de la unidad de escaneo y las propiedades de la muestra. El rango de iluminación y la profundidad de un microscopio de campo son grandes, mientras que la iluminación de un microscopio confocal se centra en un punto focal en el plano focal. La ventaja básica de la microscopía confocal es que puede realizar cortes ópticos finos en muestras fluorescentes gruesas (hasta 50 μ mo más), con un espesor de aproximadamente 0,5 a 1,5 μ m. La serie de imágenes de cortes ópticos se puede obtener moviendo la muestra hacia arriba y hacia abajo utilizando el motor paso a paso del eje Z-del microscopio. La recopilación de información de la imagen se controla dentro del plano * *, sin interferencias de señales emitidas desde otras posiciones de la muestra. Después de eliminar la influencia de la fluorescencia de fondo y aumentar la relación señal-ruido, el contraste y la resolución de las imágenes confocales mejoran significativamente en comparación con las imágenes de fluorescencia de iluminación de campo tradicionales. En muchos especímenes, intrincados componentes estructurales se entrelazan para formar sistemas complejos, pero una vez que se puedan recolectar suficientes secciones ópticas, podemos usar software para reconstruirlas en tres dimensiones. Este método experimental se ha utilizado ampliamente en la investigación biológica para dilucidar las complejas relaciones estructurales y funcionales entre células o tejidos.
