Ventajas y desventajas de la microscopía de barrido láser multifotónica (MLSM)
La microscopía de barrido láser multifotónica es un método experimental basado en la tecnología de microscopía de barrido láser, que proporciona mejores capacidades de corte óptico para la observación tridimensional. El método de excitación de fluorescencia multifotónica utiliza luz roja de longitud de onda larga o luz infrarroja cercana para recolectar imágenes de fluorescencia de alta resolución de especímenes, lo que causa un daño mínimo a los especímenes vivos. Por lo tanto, es adecuado para la obtención de imágenes de células vivas, especialmente de tejidos vivos gruesos, como cortes de cerebro, embriones, etc. Estudios de imágenes de órganos completos o incluso de cuerpos enteros.
Las ventajas son las siguientes:
1. Utilice luz roja o luz infrarroja para excitar, y la dispersión de la luz es pequeña (la dispersión de partículas pequeñas es inversamente proporcional a la cuarta potencia de la longitud de onda).
2. No se necesitan orificios y se pueden recolectar más fotones dispersos de la sección transversal de la imagen.
3. El orificio no puede distinguir los fotones dispersos emitidos desde el área desenfocada o el área de enfoque, y la relación señal-ruido de las imágenes de fotones múltiples en capas profundas es buena.
4. La luz ultravioleta o visible utilizada para la excitación de un solo fotón es fácilmente absorbida y atenuada por la muestra antes de que el haz alcance el plano focal y es difícil excitar capas profundas.
5. En términos de observación con microscopio biológico, la primera consideración es no dañar el estado activo del propio organismo y mantener el flujo de agua, concentración de iones, oxígeno y nutrientes. En el caso de la observación de la luz, tanto el calor como la energía de los fotones deben permanecer dentro de la cantidad de irradiación y la energía de la luz para que las células no resulten dañadas.
6. La microscopía multifotónica también tiene muchas ventajas. Por ejemplo, en términos de resolución tridimensional, penetración profunda, eficiencia de dispersión, luz de fondo, relación señal-ruido, control, etc., existen características trascendentes que los microscopios láser anteriores no tenían o no podían igualar.
La microscopía de barrido láser confocal multifotónica se ha extendido a diversos campos de investigación y aplicación. Puede realizar observaciones tridimensionales no destructivas de muestras en su estado natural y puede mejorar la resolución y la relación señal-ruido del sistema. Uso de materiales de excitación multifotónica Los cambios en las propiedades también pueden lograr el almacenamiento de datos de altura tridimensional y el micromecanizado tridimensional en cualquier dirección, lo que tiene un alto valor de aplicación. Se cree que con el mayor desarrollo de maquinaria, materiales, tecnología láser, etc. relacionados con la microscopía confocal multifotónica, la microscopía de barrido láser confocal fotónica recibirá un mayor desarrollo y una aplicación más amplia.
Las desventajas son las siguientes:
1. Sólo puede visualizar fluorescencia.
2. Si la muestra contiene cromóforos que pueden absorber la luz de excitación, como pigmentos, la muestra puede dañarse con el calor.
3. La resolución se reduce ligeramente. Aunque se puede mejorar utilizando agujeros confocales al mismo tiempo, habrá pérdida de señal.
4. Limitado por los costosos láseres ultrarrápidos, el costo de los microscopios de barrido multifotónicos es relativamente alto.
