Los principios y características estructurales de los microscopios de fluorescencia.
El microscopio de fluorescencia utiliza una fuente de luz puntual altamente eficiente para emitir una determinada longitud de onda de luz (como luz ultravioleta 3650 o luz azul violeta 4200) a través de un sistema de filtro de color como luz de excitación, que excita las sustancias fluorescentes en la muestra para que emitan varios colores de fluorescencia y luego observa a través del aumento de la lente objetivo y el ocular. De esta manera, incluso con una fluorescencia débil en un fondo intenso, es fácil de reconocer y tiene una alta sensibilidad. Se utiliza principalmente para el estudio de la estructura, función y composición química de las células. La estructura básica de un microscopio de fluorescencia se compone de un microscopio óptico normal y algunos accesorios como una fuente de luz fluorescente, un filtro de excitación, un divisor de haz de dos colores y un filtro de bloqueo. La fuente de luz fluorescente - generalmente utiliza lámparas de mercurio de presión ultra-alta (50-200 W), que pueden emitir luz de varias longitudes de onda, pero cada sustancia fluorescente tiene una longitud de onda de luz de excitación que produce la fluorescencia más fuerte. Por lo tanto, es necesario agregar filtros de excitación (generalmente filtros de excitación ultravioleta, violeta, azul y verde) para permitir que solo una cierta longitud de onda de luz de excitación pase a través e irradie la muestra, mientras se absorbe el resto de la luz. Después de ser irradiada con luz de excitación, cada sustancia emite fluorescencia visible con una longitud de onda más larga que la longitud de onda de irradiación en un período de tiempo muy corto. La fluorescencia tiene especificidad y generalmente es más débil que la luz de excitación. Para observar una fluorescencia específica, es necesario agregar un filtro de bloqueo (o supresión) detrás de la lente del objetivo.
Sus funciones son dos: primero, absorber y bloquear la entrada de luz de excitación al ocular para evitar alterar la fluorescencia y dañar los ojos; en segundo lugar, seleccionar y permitir el paso de una fluorescencia específica, exhibiendo un color fluorescente específico. Se deben utilizar dos tipos de filtros en combinación.
