Los microscopios de fluorescencia se pueden dividir en dos tipos según el principio de trayectoria de la luz:
1. Microscopio de fluorescencia de transmisión.
En los microscopios de fluorescencia más antiguos, la fuente de luz de excitación pasa a través del material de la muestra a través de un condensador para excitar la fluorescencia. La ventaja es que la fluorescencia es fuerte con un aumento bajo, pero la desventaja es que la fluorescencia se debilita a medida que aumenta el aumento. Por lo tanto, sólo es adecuado para observar materiales de muestra más grandes.
2.Microscopía de epifluorescencia
La luz de excitación cae hacia abajo desde la lente objetivo sobre la superficie de la muestra, es decir, se utiliza la misma lente objetivo como condensador de iluminación y lente objetivo para recoger la fluorescencia.
Es necesario agregar un divisor de haz dicroico (espejo dicroico) a la trayectoria óptica, que forma un ángulo de 45° con respecto al eje óptico. La luz de excitación se refleja en la lente del objetivo y se concentra en la muestra. La fluorescencia generada por la muestra se refleja en la superficie de la lente del objetivo y la cubierta. La luz de excitación reflejada en la superficie del portaobjetos de vidrio ingresa a la lente del objetivo al mismo tiempo y regresa al divisor de haz dicroico para separar la luz de excitación y la fluorescencia. La luz de excitación restante es absorbida por el filtro de bloqueo. Si utiliza diferentes insertos combinados de filtro de excitación/divisor de haz de doble color/filtro de bloqueo, puede satisfacer las necesidades de diferentes productos de reacción de fluorescencia.
La ventaja de este tipo de microscopio de fluorescencia es que el campo de visión está uniformemente iluminado, la imagen es clara y cuanto mayor es el aumento, más fuerte es la fluorescencia.
¿Cuáles son las principales categorías de microscopios ópticos?
1. Microscopio óptico ordinario
Los microscopios ópticos ordinarios se componen principalmente de las siguientes partes: el sistema de iluminación, que incluye la fuente de luz y el condensador; el sistema de aumento óptico, que está compuesto por la lente objetivo y el ocular. Es la parte más crítica del microscopio y está diseñada para evitar la aberración esférica excesiva y la aberración cromática, tanto el ocular como el objetivo están compuestos por grupos de lentes complejos.
2. Microscopio de barrido confocal láser
El microscopio de barrido confocal láser parece muy sofisticado y complicado. De hecho, simplemente utiliza un láser como fuente de luz de escaneo para escanear y obtener imágenes rápidamente de objetos punto por punto, línea por línea y superficie por superficie.
Debido a la longitud de onda más corta del rayo láser, el rayo en sí es muy delgado, lo que determina que el microscopio de barrido láser confocal tenga una alta resolución, aproximadamente tres veces mayor que la de un microscopio óptico común. Este tipo de microscopio se utiliza para observar la morfología celular y analizar cuantitativamente los componentes bioquímicos intracelulares y medir la morfología celular.
3. Microscopio de campo oscuro
En el centro del condensador de un microscopio de campo oscuro hay una placa luminosa que impide que la luz de iluminación entre directamente en la lente del objetivo. Sólo la luz reflejada y difractada por la muestra puede entrar en la lente del objetivo. Por tanto, el fondo del campo de visión es negro y los bordes de los objetos son brillantes.
