¿Cuáles son los componentes estructurales especiales de un microscopio fluorescente?
El bloque de filtro de color es una parte importante de un microscopio de fluorescencia y sus componentes principales consisten en un primer filtro de barrera para la luz de excitación, un segundo filtro de barrera para la luz de emisión y un espejo divisor del haz. Los modelos de filtros de color y los nombres de los distintos fabricantes suelen ser contradictorios.
1. Filtro de luz de excitación y filtro de luz de emisión: según las características de la fuente de luz y el pigmento fluorescente, generalmente se seleccionan los siguientes tres tipos de combinación para proporcionar luz de excitación dentro de un cierto rango de longitud de onda y permitir que la fluorescencia excitada por la muestra pase y llegue al ocular para obtener imágenes.
Excitación UV: el filtro de luz de excitación puede permitir el paso de la luz UV y bloquear el paso de la luz visible por encima de 400 nm. El filtro de luz de emisión correspondiente permite el paso de la luz azul y la luz en el campo de visión aparece azul, como cuando se aplica a la tinción DAPI.
Excitación de luz azul: el filtro de luz de excitación puede permitir el paso de la luz azul y bloquear la luz de otras longitudes de onda. El filtro de emisión de luz correspondiente deja pasar la luz verde, como por ejemplo los marcadores de tinción GFP.
Excitación de luz verde: el filtro de luz de excitación permite el paso de la luz verde y bloquea la luz de otras longitudes de onda. El filtro de emisión de luz correspondiente suele dejar pasar la luz roja, como por ejemplo la tinción con rodamina.
2. Filtro de color semitransparente y semirreflectante: Su función es bloquear completamente el paso de la luz de excitación y reflejarla; Y emite luz dentro del rango de longitud de onda correspondiente. Su modelo corresponde al filtro de luz de excitación y al filtro de luz de emisión.
(2) Lente objetivo y ocular
Se pueden aplicar varios objetivos, pero es mejor elegir lentes con escala adicional y reducción de la aberración cromática, ya que su autofluorescencia es extremadamente baja y su rendimiento de transmisión de luz (rango de longitud de onda) es adecuado para la fluorescencia. Debido al hecho de que el brillo de fluorescencia de una imagen en el campo del microscopio es directamente proporcional al cuadrado de la relación de apertura de la lente objetivo e inversamente proporcional a su aumento, para mejorar el brillo de las imágenes de fluorescencia, se debe utilizar una lente objetivo con una relación de apertura mayor. Especialmente para muestras con fluorescencia insuficiente, se debe utilizar una lente objetivo con una alta relación de apertura y alta transmitancia de luz, acompañada de un ocular con el menor aumento posible.
(3) Otros dispositivos ópticos
La capa reflectante de un espejo suele estar recubierta de aluminio porque el aluminio absorbe menos luz ultravioleta y visible en la región azul violeta, reflejando más del 90% (mientras que la plata tiene una reflectividad de sólo el 70%). Generalmente se utilizan espejos planos. La lente de enfoque, diseñada y fabricada específicamente para microscopios de fluorescencia, está hecha de vidrio de cuarzo u otro vidrio que transmite luz ultravioleta. El dispositivo de luz descendente, además de tener la función de fuente de luz transmisora, es más adecuado para la observación directa de muestras opacas y semitransparentes, como placas gruesas, membranas filtrantes, colonias bacterianas, cultivos de tejidos y otras muestras. En los últimos años, se han desarrollado muchos tipos nuevos de microscopios de fluorescencia utilizando un dispositivo de luz descendente, conocido como microscopio de fluorescencia de luz descendente.
(4) Fuente de luz
Hoy en día, se suelen utilizar como fuentes de luz lámparas de mercurio de alta-presión de 50 o 100 W. Durante el funcionamiento, se produce una descarga entre dos electrodos, lo que hace que el mercurio se evapore y la presión dentro de la esfera aumente rápidamente (este proceso suele tardar entre 5 y 15 minutos). Durante este proceso se emiten cuantos de luz y la longitud de onda de la luz liberada es suficiente para excitar diversas sustancias fluorescentes. Por tanto, se utiliza ampliamente en microscopios de fluorescencia.
La vida útil de las lámparas de mercurio es relativamente corta, normalmente 200 horas. En respuesta a esta limitación en la vida útil, en los últimos años se ha utilizado ampliamente un nuevo tipo de fuente de luz fluorescente X-Cite con una vida útil súper larga de 2000 horas y uso flexible - no requiere precalentamiento, está lista para usar.
