¿Por qué es necesario utilizar un microscopio confocal?
1. Los microscopios ópticos han alcanzado un estado de perfección gracias a los esfuerzos y mejoras de nuestros grandes predecesores. De hecho, los microscopios comunes pueden proporcionarnos hermosas imágenes microscópicas de manera simple y rápida. Sin embargo, ocurrió un evento que trajo una innovación revolucionaria a este mundo casi perfecto de la microscopía. Esta fue la invención del "microscopio confocal de barrido láser". La característica de este nuevo tipo de microscopio es que utiliza un sistema óptico que extrae información de la imagen sólo en la superficie donde se enfoca el foco, y restaura la información obtenida en la memoria de la imagen mientras cambia el enfoque, obteniendo así información 3D completa. Una imagen vívida de inteligencia. Mediante este método, se puede obtener fácilmente información sobre la forma de la superficie que no se puede confirmar con un microscopio normal. Además, para los microscopios ópticos comunes, "aumentar la resolución" y "profundizar la profundidad de enfoque" son condiciones contradictorias, especialmente con grandes aumentos. Sin embargo, en microscopía confocal, este problema se resuelve fácilmente.
2. Ventajas del sistema óptico confocal
El sistema óptico confocal realiza una iluminación puntual sobre la muestra y la luz reflejada también utiliza un receptor puntual para recibir la luz. Cuando la muestra se coloca en la posición de enfoque, casi toda la luz reflejada puede llegar al fotorreceptor. Cuando la muestra está desenfocada, la luz reflejada no puede llegar al fotorreceptor. En otras palabras, en el sistema óptico confocal, solo se emitirá la imagen que coincida con el foco, y se protegerán los puntos de luz y la luz dispersada inútil.
3. ¿Por qué utilizar láser?
En el sistema óptico confocal, la muestra se ilumina en un punto y la luz reflejada también se recibe mediante un fotorreceptor puntual. Por lo tanto, se hacen necesarias fuentes de luz puntuales. Los láseres son fuentes de luz muy puntuales. En la mayoría de los casos, la fuente de luz de los microscopios confocales utiliza fuentes de luz láser. Además, las características del láser, como la monocromaticidad, la directividad y la excelente forma del haz, también son razones importantes para su adopción generalizada.
4. Se hace posible la observación en tiempo real basada en escaneo de alta velocidad
Para el escaneo láser se utiliza un deflector óptico acústico (elemento AO) en dirección horizontal y un espejo de escaneo de haz controlado servoeléctricamente (servogalvano-espejo) en dirección vertical. Dado que la unidad de desviación acústico-óptica no tiene una parte de vibración mecánica, puede escanear a alta velocidad, lo que hace posible la observación en tiempo real en la pantalla de monitoreo. La alta velocidad de este tipo de imágenes es un elemento muy importante que afecta directamente la velocidad de enfoque y recuperación de la posición.
5. La relación entre la posición de enfoque y el brillo.
En el sistema óptico confocal, el brillo es máximo cuando la muestra se coloca correctamente en la posición de enfoque, y su brillo disminuirá bruscamente delante y detrás de ella (línea continua en la Figura 4). Esta selectividad sensible del plano focal es también el principio detrás de la determinación de la dirección de la altura y la expansión de la profundidad del enfoque del microscopio confocal. Por el contrario, un microscopio óptico normal no tiene cambios de brillo obvios antes y después de la posición de enfoque (línea de puntos en la Figura 4).
6. Alto contraste y alta resolución
En los microscopios ópticos comunes, la luz reflejada de la parte desenfocada interferirá y se superpondrá con la parte de imagen enfocada, lo que dará como resultado una reducción en el contraste de la imagen. Por el contrario, en el sistema óptico confocal, la luz parásita fuera del foco y la luz parásita dentro de la lente del objetivo se eliminan casi por completo, por lo que se puede obtener una imagen con un contraste muy alto. Además, debido a que la luz pasa dos veces a través de la lente del objetivo, la imagen puntual se vuelve más nítida, lo que también mejora el poder de resolución del microscopio.
