¿Qué especificaciones de muestra se necesitan para microscopía óptica?
En el proceso de preparación de muestras del microscopio óptico, el grosor del corte de la muestra está entre 2-25um; el grosor de corte del microscopio electrónico está dentro de 50-100nm (excepto para el microscopio electrónico de alto voltaje, cuyo grosor de muestra puede llegar a 1 um), por lo que el método de corte utilizado no es el mismo.
En términos de soporte, el soporte de la sección del microscopio óptico es un portaobjetos de vidrio, mientras que el soporte de la sección del microscopio electrónico es una rejilla.
En cuanto a la fijación, los cortes del microscopio óptico se fijan con un fijador compuesto, mientras que los cortes del microscopio electrónico se fijan repetidamente con un fijador único.
En términos de tinción, la tinción de muestras ópticas es relativamente simple. De acuerdo con diferentes muestras de observación y tipos de microscopios ópticos, generalmente es suficiente teñir con algunos agentes de tinción fijos. Existen muchos y complicados métodos para volver a teñir muestras de microscopio electrónico, como la tinción negativa, la tinción con plata, etc.
En cuanto a la inclusión, se utilizan parafina, colodión, gelatina, etc. como agentes de inclusión para secciones de microscopio óptico; La resina epoxi, la resina de poliestireno, la resina de isobutileno y la resina soluble en agua se utilizan como agentes de inclusión para las secciones del microscopio electrónico.
Para garantizar que el campo de visión del microscopio pueda iluminarse uniforme y completamente, el sistema óptico de iluminación debe ajustarse cuando el microscopio se instala y depura por primera vez. Este es un medio importante y la forma más básica de usar el microscopio correctamente y obtener resultados correctos y confiables. requisitos Además, dominar correctamente el ajuste del sistema de camino óptico de iluminación es un paso necesario después de reemplazar la bombilla de la fuente de luz durante el uso del microscopio, y también es un medio necesario para verificar el rendimiento del microscopio de vez en cuando durante el día a día. usar. El ajuste del sistema de camino óptico de iluminación del microscopio incluye principalmente los siguientes cuatro elementos: 1. Ajuste preliminar de la cámara de la lámpara de la fuente de luz fuera del microscopio ① Primero abra la carcasa de la cámara de la lámpara, presione el clip de resorte para colocar la bombilla halógena en el enchufe, y evite el contacto directo con la bombilla con los dedos durante la instalación (se puede separar con un paño suave o papel) para evitar que haya huellas dactilares y otra suciedad en la bombilla, lo que afectará la vida útil de la bombilla. ② Coloque la carcasa de la lámpara sobre la mesa, después de encenderla, use un destornillador especial para ajustar el orificio de la perilla de enfoque de la lámpara (marcado con "←→"), de modo que el filamento se proyecte en la pared 1-2 m de distancia, y la imagen del filamento se ajusta. Luego ajuste la altura de la lámpara y ajuste el orificio del hilo (marcado con "──") para que la posición del filamento sea la adecuada; luego ajuste la posición izquierda y derecha de la lámpara para ajustar el orificio del tornillo (marcado con "──") para que la posición izquierda y derecha del filamento sea la adecuada.
2. El propósito de verificar y corregir la posición del iluminante de la fuente de luz (filamento) en el microscopio es ajustar el extremo de la imagen del iluminante directamente en el campo de visión de la lente del objetivo, y asegurar que el campo de visión de el microscopio se ilumina completa y uniformemente desde la perspectiva de la fuente de luz. Iluminación, que es un requisito previo para ajustar el sistema de iluminación Kuhler. Herramientas básicas necesarias: El telescopio de centrado está equipado cuando se compra el microscopio. ① Desenchufe la funda de vidrio esmerilado en la carcasa de la lámpara y vuelva a colocar la carcasa de la lámpara en el microscopio. ② Elija una lente de objetivo de 10 ×, encienda el programa de fuente de luz para encontrar la muestra y enfóquela claramente, y luego use una lente de objetivo de 40 × para enfocar la muestra claramente (lente de objetivo de 40 × Puede ver la imagen completa del filamento ); ③ Abra el diafragma de apertura y el diafragma de campo del condensador al máximo; ④ Desconecte uno de los oculares, reemplácelo con un telescopio de centrado, tome la parte blanca, estire el ocular negro con la otra mano. Puede ver la imagen del filamento en el campo de visión; ⑤ Si la posición del filamento no es adecuada, ajuste el orificio "──" para ajustar la imagen del filamento en dirección horizontal y ajuste el orificio "──" para ajustar la imagen del filamento en dirección vertical hasta que Ajuste la imagen del filamento a la imagen circular de luz que llena justo la apertura de la lente del objetivo; ⑥ Después del ajuste, vuelva a colocar la funda de vidrio esmerilado en la posición original, desenchufe el telescopio de centrado y vuelva a colocar el ocular para el próximo ajuste. El ajuste mencionado anteriormente de la cámara de la lámpara de la fuente de luz de iluminación fuera del microscopio y la verificación de la posición del cuerpo luminoso de la fuente de luz dentro del microscopio solo deben realizarse cuando el microscopio se instala y depura por primera vez y cuando se reemplaza la bombilla. , y el microscopio no se puede ajustar al azar cuando se usa el microscopio. En caso de confusión, se puede volver a ajustar al estado original de acuerdo con los pasos anteriores.
3. Ajuste correcto del sistema de iluminación Kohler Una de las tareas principales del ajuste correcto del microscopio es el ajuste del sistema de camino óptico de iluminación, y la clave es el ajuste del sistema de iluminación Kohler. Cada persona que usa un microscopio, especialmente aquellos que hacen fotomicrografías, deben tener una cierta comprensión y dominio del principio del sistema de iluminación Kuhler y sus pasos de ajuste para poder aprovechar al máximo las funciones del microscopio y tomar fotografías. Las fotos que salen pueden ser más consistentes y perfectas en efecto. El principio del sistema de iluminación de Kohler es simple: la luz emitida por cualquier punto del iluminante de la fuente de luz puede iluminar el campo de visión del microscopio, y la luz emitida por cada punto del iluminante de la fuente de luz se recoge y en el campo de vista del microscopio Se logra una iluminación muy completa y uniforme. El propósito de ajustar el sistema de iluminación Kuhler es obtener una iluminación uniforme y suficiente para el campo de visión observado y evitar que la luz parásita afecte o interfiera con el sistema de imágenes, para evitar que la película se empañe durante la fotografía. Componentes necesarios para un sistema de iluminación Kohler de alto ajuste: diafragma de campo, sistema de lente de condensador que se puede ajustar en el eje. ① Seleccione una lente de objetivo de 10× y un ocular de 10×. ② Coloque la lente frontal del condensador en la trayectoria óptica, ajuste el diafragma de apertura en una posición moderada (ni demasiado grande ni demasiado pequeña), luego levante el condensador a la posición posición superior y ajuste la placa giratoria del condensador a la posición de campo brillante "J" ③ Ajuste el diafragma de campo al mínimo (0,1)
④ Coloque la muestra biológica sellada en el escenario, encienda la fuente de luz y enfoque claramente
⑤ Habrá un área parcialmente iluminada o un punto brillante en el campo de visión, que es la imagen borrosa del diafragma de campo, en la que se pueden ver claramente los detalles de la muestra; afuera hay un campo de visión más oscuro, que no necesariamente puede ver claramente los detalles de la muestra
⑥Ajuste ligeramente el condensador hacia abajo, de modo que el punto brillante en el campo de visión se reduzca gradualmente y se convierta gradualmente en una imagen poligonal clara, que es la imagen clara del diafragma de campo;
⑦ Generalmente, la imagen poligonal no está en el centro del campo de visión, y es necesario ajustar un par de tornillos de centrado del condensador para ajustar la imagen poligonal del diafragma de campo a la posición central;
⑧Abra gradualmente el diafragma del campo de visión para hacer que la imagen del polígono sea un polígono inscrito del campo de visión y verifique aún más el estado de alineación. Si la alineación no es ideal, continúe ajustando el tornillo de alineación;
⑨Abra ligeramente el diafragma del campo de visión, de modo que su imagen poligonal desaparezca en el borde del campo de visión. Hasta el momento, se completó el ajuste del sistema de iluminación Kohler. Después de ajustar el sistema de iluminación de Kohler, todo el campo de visión se ilumina uniformemente y las micrografías tomadas son brillantes y claras con un contraste normal.
