¿Qué tipo de microscopio se utiliza para ver la forma de las células microbianas?
Un término colectivo para todos los organismos diminutos que son difíciles de observar a simple vista. Los microorganismos incluyen bacterias, virus, hongos y algunas algas. (Sin embargo, algunos microorganismos son visibles a simple vista, como hongos pertenecientes a hongos, Ganoderma lucidum, etc.) Los virus son un tipo de "organismos no celulares" compuestos por unos pocos componentes como ácidos nucleicos y proteínas, pero su la supervivencia debe depender de las células vivas. Según los diferentes ambientes que existen, se pueden dividir en microorganismos procarióticos, microorganismos espaciales, microorganismos fúngicos, microorganismos de levadura, microorganismos marinos, etc.
El papel y el daño de los microorganismos:
Uno de los impactos más importantes de los microorganismos en los humanos es la prevalencia de enfermedades infecciosas. El 50 por ciento de las enfermedades humanas son causadas por virus. La historia de los microbios que causan enfermedades humanas es la historia de la lucha constante de los seres humanos contra ellos. El ser humano ha avanzado mucho en la prevención y tratamiento de enfermedades, pero siguen produciéndose nuevas y reapariciones de infecciones microbianas, así como un gran número de enfermedades víricas que carecen de fármacos terapéuticos efectivos. El mecanismo patogénico de algunas enfermedades no está claro. El abuso de un gran número de antibióticos de amplio espectro ha provocado una fuerte presión de selección, provocando la mutación de muchas cepas, lo que lleva a la aparición de resistencia a los medicamentos, y la salud humana se ve amenazada por nuevas amenazas. Algunos virus segmentados pueden mutar mediante recombinación o reordenamiento. El ejemplo más típico es el virus de la gripe.
Después de conocer la definición específica de microorganismos, qué tipo de microscopio debe usar el experimentador al estudiar microorganismos para ver, y qué microscopio se puede usar para ver mejor y para observar y analizar formas microbianas comunes.
La invención del microscopio es poder ver objetos sonrientes que no se pueden ver a simple vista. El tamaño de los microorganismos es muy pequeño, por lo que deben ser magnificados y observados con la ayuda de un microscopio. Además, existen muchos tipos de microorganismos, por lo que básicamente la mayoría de los microscopios ópticos pueden Para observar microorganismos, la siguiente pregunta es qué tipo de microscopio se debe usar para la observación y análisis de microorganismos. Los microscopios comunes para la observación de la morfología microbiana incluyen microscopios biológicos, microscopios de contraste de fase, microscopios invertidos, microscopios de fluorescencia y microscopios confocales. Microscopio y así sucesivamente.
A continuación se describen los diversos microscopios utilizados para observar microorganismos:
1. Microscopio de luz ordinaria
La luz natural o la luz se utiliza como fuente de luz, y su longitud de onda es de aproximadamente {{0}}.4 μm. La resolución del microscopio es la mitad de la longitud de onda, es decir, 0,2 μm, y la imagen más pequeña visible a simple vista es 0,2 mm. Por lo tanto, usar un espejo de aceite (inmersión) para ampliar 1000 veces puede aumentar las partículas de 0,2 μm a 0,2 mm visibles a simple vista. Los microscopios ópticos ordinarios se pueden utilizar para la observación de bacterias, actinomicetos y hongos.
2. La microscopía de campo oscuro se usa comúnmente para observar la morfología y el movimiento microbiano sin teñir. Después de instalar el condensador de campo oscuro en el microscopio ordinario, la luz no puede penetrar directamente desde el medio y el campo de visión es oscuro. Cuando la muestra recibe luz oblicua desde el borde del condensador, puede dispersarse, por lo que se pueden observar microorganismos brillantes en el fondo del campo oscuro, como bacterias o espiroquetas.
3. Microscopio de contraste de fase El microscopio de contraste de fase utiliza el efecto de luz de la placa de diferencia de fase para cambiar la fase de luz y la amplitud de la luz directa, y convierte la diferencia de fase de luz en diferencia de intensidad de luz. Bajo un microscopio de contraste de fase, cuando la luz pasa a través de una muestra sin teñir, la diferencia en la fase de la luz es causada por la inconsistencia de la densidad de las diferentes partes de la muestra, y se puede observar la morfología, la estructura interna y el modo de movimiento de los microorganismos.
4. Microscopio de fluorescencia El microscopio de fluorescencia es básicamente el mismo que el microscopio óptico ordinario, la principal diferencia es la fuente de luz, el filtro y el condensador. En la actualidad, la mayoría de ellos utilizan dispositivos de epi-luz, y las lámparas de mercurio de alta presión se utilizan comúnmente como fuentes de luz, que pueden emitir luz ultravioleta o azul-violeta. Hay dos tipos de filtros: filtro de excitación y filtro de absorción. Además de los condensadores de campo claro generales, los condensadores de campo oscuro también se pueden usar en microscopios de fluorescencia usando luz azul para mejorar el contraste entre la fluorescencia y el fondo. Este método es aplicable a la detección o identificación de bacterias teñidas con pigmentos fluorescentes o combinadas con anticuerpos fluorescentes.
5. Los microscopios electrónicos utilizan el flujo de electrones como fuente de luz. En comparación con la luz visible, la longitud de onda es decenas de miles de veces diferente, lo que mejora enormemente la resolución. La bobina magnética se utiliza como sistema de amplificación óptica y la ampliación puede alcanzar decenas de miles o cientos de miles de veces. A menudo se usa en partículas de virus. y la observación de la ultraestructura bacteriana.
Observación de muestras microbianas no teñidas:
Las muestras sin teñir generalmente se pueden usar para observar la morfología, el poder y el movimiento bacterianos. Las bacterias son incoloras y transparentes cuando no están teñidas, y se observan al microscopio principalmente por la diferencia entre el índice de refracción de la bacteria y el entorno circundante. Las bacterias con flagelos se mueven vigorosamente, mientras que las bacterias sin flagelos muestran un movimiento browniano irregular. Las bacterias viables como Treponema pallidum, Leptospira y Campylobacter tienen formas y patrones de movimiento distintivos, que son de importancia diagnóstica. Los métodos comúnmente utilizados son el método de caída de presión, el método de caída colgante y el método capilar.
1. Método de gota colgante Aplique vaselina alrededor del orificio cóncavo del portaobjetos de vidrio cóncavo limpio, tome un anillo de suspensión bacteriana con un asa de inoculación y colóquelo en el centro del cubreobjetos, luego alinee el orificio cóncavo del portaobjetos de vidrio cóncavo con coloque la gota en el centro del cubreobjetos y coloque la cubierta, luego gírela rápidamente, presione ligeramente el cubreobjetos para que se adhiera firmemente a la vaselina en el borde del orificio cóncavo, y luego observe bajo un alto poder microscopio (o de campo oscuro).
2. Tome un anillo de suspensión bacteriana con un asa de inoculación y colóquelo en el centro de un portaobjetos de vidrio limpio mediante el método de caída de presión y cubra suavemente la suspensión bacteriana con un cubreobjetos, teniendo cuidado de evitar la generación de burbujas de aire y prevenir la suspensión bacteriana se desborde. Observación de campo claro (o campo oscuro) bajo una lente de alta potencia.
3. El método capilar se utiliza principalmente para el examen de la cinética de las bacterias anaerobias. Por lo general, elija 60~70mm de largo. Después de sifonar la suspensión de bacterias anaerobias a través de un capilar con una abertura de 0,5-1,0 mm, selle los dos extremos del capilar con una llama. El capilar se fijó en el portaobjetos de vidrio con papel plástico y se observó bajo una lente de alta potencia en campo oscuro.
Observación de muestras microbianas teñidas con un microscopio:
Después de teñir la muestra bacteriana, debido al marcado contraste de color entre la bacteria y el entorno circundante, las características morfológicas de la bacteria (como el tamaño, la forma, la disposición, etc.) de la bacteria y algunas estructuras especiales pueden ser claramente observadas bajo un microscopio óptico ordinario (como cápsulas, flagelos, esporas, etc.), y las bacterias pueden clasificarse e identificarse de acuerdo con la reactividad de tinción.
(1) Procedimiento general de tinción bacteriana El procedimiento general de tinción bacteriana es: frotis (secado)—fijación—tinción.
1. Frotis Preparación de sangre, secreciones, excreciones, líquido de punción y cultivo líquido, y frotis directos de película delgada en portaobjetos de vidrio; autopsia o tejidos animales infectados, frotis de la lesión con un hisopo de algodón para la toma de muestras. Para la preparación de colonias bacterianas o céspedes en medio sólido, primero use un asa de inoculación para tomar un anillo de solución salina normal y colóquelo en el centro del portaobjetos, luego use un asa de inoculación estéril para tomar una pequeña cantidad de cultivo y triturarlo. uniformemente en solución salina normal, y extenderlo a 1cm2 Superficies pintadas grandes o pequeñas, dejar secar naturalmente a temperatura ambiente o secar lentamente a distancia.
2. El propósito de la fijación es matar bacterias, coagular proteínas y estructuras bacterianas y facilitar la tinción; promueva que las bacterias se adhieran al portaobjetos para evitar que el agua las elimine durante el lavado; cambia la permeabilidad de las bacterias a los tintes, lo que es beneficioso para la estructura de las células bacterianas de la tinción. Suele fijarse calentando con una llama, y el frotis seco se pasa rápidamente por la llama 3 veces. Es mejor no quemarse la piel del dorso de la mano cuando toca el portaobjetos.
3. Teñido De acuerdo con los diferentes propósitos de inspección, elija diferentes métodos de teñido para teñir. Al teñir, agregue la solución de tinte gota a gota para aumentar la cobertura.
4. Mordiente Cualquier sustancia que puede aumentar la afinidad entre el tinte y el objeto teñido, fijar el tinte en el objeto teñido y causar un cambio en la permeabilidad de la membrana celular se llama mordiente. Comúnmente se utilizan alumbre, ácido tánico, sales metálicas y yodo, etc., y el calentamiento también se utiliza para promover la coloración. Los mordientes se pueden usar entre la tinción primaria y la contratinción, y también se pueden usar después de la fijación o contenidos en el fijador y la tinción.
5. Decoloración Cualquier agente químico que pueda eliminar el color del objeto teñido se denomina decolorante. El etanol, la acetona, etc. se utilizan comúnmente como decolorantes. El agente decolorante puede detectar el grado de estabilidad de la combinación de bacterias y tintes, que puede usarse para la tinción diferencial.
6. Contratinción Las bacterias o sus estructuras que han sido decoloradas a menudo se contrateñen con una solución de contratinción para una fácil observación. El color de la solución de contratinción es diferente al de la solución de tintura primaria para formar un fuerte contraste. La contratinción no debe ser demasiado fuerte, para no tapar el color de la tinción inicial.
