¿Cuáles son las ventajas de la microscopía láser confocal?
En comparación con los microscopios tradicionales de campo amplio, la microscopía confocal de barrido láser tiene las características de alta definición, alta resolución y alta sensibilidad. Es ampliamente utilizado en el campo de la biomedicina y se ha convertido en una importante herramienta de imagen en este campo. ¿Por qué la confocal consigue tanto amor y qué ventajas tiene? Este artículo enumera tres aspectos para discutir las ventajas de confocal.
Solo recopile la señal en el plano focal, haciendo que la imagen sea clara y no esté borrosa
Entonces, ¿cómo logra esta ventaja la microscopía confocal? Esto se debe al hardware confocal clave: el agujero de alfiler, como se muestra en la Figura 2. Es un pequeño agujero en frente del detector y se coloca en el plano óptico conjugado con el plano focal de la muestra. Cuando la luz de excitación irradie la muestra, tanto el plano focal como el plano no focal del área de la muestra se excitarán para generar señales de fluorescencia, ajuste el tamaño del orificio de alfiler apropiado (generalmente 1 Au), de modo que la señal de fluorescencia en el plano focal (línea punteada verde) pueden ser Las señales fluorescentes (líneas punteadas rojas y azules) que pasan a través del orificio para alcanzar el detector fuera del plano focal no pueden alcanzar el detector a través del orificio. Mediante la adición de orificios de hardware, el confocal puede obtener imágenes claras y de alta calidad sin cambiar el método de fabricación de microscopios de fluorescencia ordinarios.
Debido a la existencia del estenopo, solo podemos adquirir la señal en el plano focal y obtener una imagen bidimensional de alta resolución. Al ajustar continuamente la posición del eje Z, se pueden obtener imágenes bidimensionales en diferentes posiciones del eje Z y se puede obtener una serie de imágenes continuas de "corte óptico". Después de obtener estos cortes ópticos, el módulo 3D equipado con el software del instrumento puede usarse para reconstruir la imagen 3D para construir una imagen 3D clara. Esta colección continua, no destructiva, de imágenes de cortes ópticos realiza la función de "TC celular".
La precisión de los resultados de la colocalización está estrechamente relacionada con la resolución de la imagen, por lo que debemos elegir un método de obtención de imágenes de mayor resolución al realizar experimentos de colocalización. En comparación con los microscopios tradicionales, la microscopía confocal se ha convertido en una poderosa herramienta para la investigación de colocalización debido a sus ventajas de alta resolución.
Debido a la existencia del límite de difracción, la resolución óptica confocal convencional ronda los 200nm. Cuando necesitamos observar estructuras de más de 200 nm, confocal puede determinar con precisión el grado de colocalización. Si se requiere un análisis de colocalización, se puede seleccionar el módulo de análisis de colocalización equipado en el software confocal.
