Microscopio de biofluorescencia vertical
El principio de la microscopía de fluorescencia es utilizar una fuente de luz puntual altamente eficiente (como una lámpara de mercurio de presión ultra alta) para emitir una cierta longitud de onda de luz (como la luz ultravioleta 3650 λ o luz azul púrpura 4200 λ) a través de un sistema de filtro de color como luz de filtro de color, que excita las sustancias de las fluores de las fluores en los especificios a los diversos colores de la fluorescencia de la fluorescencia. Luego, se filtra mediante un filtro de bloqueo (o supresión) detrás de la lente objetivo y se observa a través del efecto de aumento del ocular.
El filtro de bloqueo tiene dos funciones: en primer lugar, absorbe y impide que la luz de excitación entre en el ocular para evitar interferir con fluorescencia y dañar los ojos; El segundo es seleccionar y permitir que pase fluorescencia específica, exhibiendo un color fluorescente específico.
Los microscopios de fluorescencia se pueden dividir en dos tipos basados en el principio de la ruta de la luz:
1. Microscopio de fluorescencia de transmisión
Los microscopios de fluorescencia más antiguos usan un foco para excitar la fluorescencia al pasar la fuente de luz de excitación a través del material de la muestra. Su ventaja es una fuerte fluorescencia a baja aumento, pero su desventaja es que su fluorescencia disminuye al aumentar el aumento. Por lo tanto, solo es adecuado para observar materiales de muestra más grandes.
2. Microscopio de fluorescencia de luz que cae
La luz de excitación cae de la lente objetivo en la superficie de la muestra, utilizando la misma lente objetivo que el condensador de iluminación y la lente objetivo para recolectar fluorescencia.
Se debe agregar un divisor de haz de doble color (espejo dicroico) a la ruta óptica, que forma un ángulo de 45 grados con el eje óptico. La luz de excitación se refleja en la lente objetivo y se centra en la muestra. La fluorescencia generada por la muestra, así como la luz de excitación reflejada desde la superficie de la lente objetivo y el vidrio de cubierta, ingrese la lente objetivo al mismo tiempo y regrese al divisor de haz de color dual para separar la luz de excitación y la fluorescencia. La luz de excitación residual se bloquea mediante la absorción del filtro. Si se utilizan diferentes combinaciones de filtros de excitación, separadores de haz de doble color y filtros de bloqueo, pueden satisfacer las necesidades de diferentes productos de reacción fluorescentes.
Las ventajas de este microscopio de fluorescencia son la iluminación de campo uniforme, imágenes claras y fluorescencia más fuerte con mayor aumento.
