Hay dos tipos de microscopios de fluorescencia según sus trayectorias de luz.
1. Microscopio de fluorescencia de transmisión: la fuente de luz de excitación pasa a través del material de la muestra a través de un condensador para excitar la fluorescencia. Generalmente se utiliza un colector de campo oscuro, o se puede utilizar un colector ordinario, y el reflector se ajusta para desviar e irradiar lateralmente la luz de excitación hacia la muestra. Este es un microscopio de fluorescencia más antiguo. La ventaja es que la fluorescencia es fuerte con un aumento bajo, pero la desventaja es que la fluorescencia se debilita a medida que aumenta el aumento. Por lo tanto, es mejor observar materiales de muestra más grandes.
2. El microscopio de epifluorescencia es un nuevo tipo de microscopio de fluorescencia desarrollado en los tiempos modernos. La diferencia con lo anterior es que la luz de excitación cae hacia abajo desde la lente objetivo hasta la superficie de la muestra, es decir, se utiliza la misma lente objetivo como condensador de iluminación y lente objetivo para recolectar fluorescencia. Es necesario agregar un divisor de haz de dos colores al camino óptico, que es del 45% con el uranio óptico. En ángulo, la luz de excitación se refleja en la lente del objetivo y se concentra en la muestra. La fluorescencia generada por la muestra y la luz de excitación reflejada por la superficie de la lente del objetivo y la superficie del cubreobjetos ingresan a la lente del objetivo al mismo tiempo y regresan al divisor de haz dicromático, de modo que la luz de excitación se separa de la fluorescencia, la excitación residual Luego, la luz es absorbida por el filtro de bloqueo. Si utiliza diferentes insertos combinados de filtro de excitación/divisor de haz de doble color/filtro de bloqueo, puede satisfacer las necesidades de diferentes productos de reacción de fluorescencia. La ventaja de este tipo de microscopio de fluorescencia es que el campo de visión está uniformemente iluminado, la imagen es clara y cuanto mayor es el aumento, más fuerte es la fluorescencia.
(2) Cómo utilizar el microscopio de fluorescencia.
1. Encienda la fuente de luz y la lámpara de mercurio de presión ultraalta deberá calentarse durante varios minutos para alcanzar su punto más brillante.
2. Los microscopios de fluorescencia de transmisión requieren que se instale el filtro de excitación requerido entre la fuente de luz y el condensador, y que se instale el filtro de bloqueo correspondiente detrás de la lente objetivo. Los microscopios de epifluorescencia deben insertar el filtro de excitación/divisor de haz de dos colores/filtro de bloqueo requerido en la ranura del paso de luz.
3. Utilice un microscopio de bajo aumento para observar y ajuste el centro de la fuente de luz de acuerdo con los dispositivos de ajuste de diferentes modelos de microscopios de fluorescencia para que quede ubicado en el centro de todo el punto de iluminación.
4. Coloque la pieza de muestra y ajuste el enfoque para observar. Preste atención durante el uso: no observe el filtro directamente con los ojos para evitar daños oculares; al observar la muestra con una lente de aceite, se debe utilizar una lente de aceite especial no fluorescente; la lámpara de mercurio de alta presión no se puede volver a abrir inmediatamente después de apagarla. Se puede reiniciar después de 5 minutos; de lo contrario, será inestable y afectará la vida útil de la lámpara de mercurio.
(3) Observe bajo el microscopio de fluorescencia en la plataforma de enseñanza usando un filtro de luz azul-violeta. Se puede ver que el pasaje es o. En las células teñidas con tinte fluorescente naranja de acridina al 01%, el núcleo y el citoplasma se excitan para producir dos colores diferentes de fluorescencia (verde oscuro y rojo anaranjado).
