Existen dos tipos de microscopios de fluorescencia según su trayectoria óptica:
1. Microscopio de fluorescencia de transmisión: la fuente de luz de excitación se transmite a través del material de la muestra a través de un condensador para excitar la fluorescencia. Se pueden utilizar colectores de luz de campo oscuro de uso común, o colectores de luz ordinarios, para ajustar el reflector para convertir la luz de excitación y la luz lateral sobre la muestra. Este es un microscopio de fluorescencia relativamente anticuado. Su ventaja es que la fluorescencia es fuerte con un aumento bajo, mientras que su desventaja es que la fluorescencia se debilita a medida que aumenta el aumento. Por lo tanto, es mejor para observar materiales de muestra más grandes.
2. Microscopio de fluorescencia de haz descendente Este es un nuevo tipo de microscopio de fluorescencia desarrollado en los tiempos modernos. A diferencia del anterior, la luz de excitación cae desde la lente objetivo hasta la superficie de la muestra, utilizando la misma lente objetivo como condensador de iluminación y lente objetivo para recoger la fluorescencia. Es necesario agregar un separador de haz de doble color al camino óptico, que se encuentra en un ángulo de 45 grados con respecto al uranio ligero. La luz de excitación se refleja en la lente del objetivo y se concentra en la muestra. La fluorescencia generada por la muestra, así como la luz de excitación reflejada desde la superficie de la lente del objetivo y el cubreobjetos, ingresan a la lente del objetivo simultáneamente y regresan al separador de haz dicroico, separando la excitación y la fluorescencia. La excitación residual es entonces absorbida por el filtro de bloqueo. Si se utilizan diferentes combinaciones de filtros de excitación/separadores de haz de color dual/filtro de bloqueo, pueden satisfacer las necesidades de diferentes productos de reacción fluorescentes. La ventaja de este microscopio fluorescente es que el campo de iluminación de visión es uniforme, la imagen es clara y cuanto mayor es el aumento, más fuerte es la fluorescencia.
(2) Uso del microscopio de fluorescencia
1. Encienda la fuente de luz y la lámpara de mercurio de presión ultraalta debe precalentarse durante unos minutos para alcanzar su punto máximo.
2. El microscopio de fluorescencia de transmisión requiere que se instale el filtro de excitación requerido entre la fuente de la lámpara y el condensador, y que se instale el filtro de bloqueo correspondiente detrás de la lente objetivo. El microscopio de fluorescencia de haz descendente necesita insertar el filtro de excitación/separador de haz de doble color/bloque de filtro de bloqueo requerido en la ranura de la trayectoria óptica.
3. Observe con un microscopio de baja potencia y ajuste el centro de la fuente de luz de acuerdo con los dispositivos de ajuste de diferentes modelos de microscopios de fluorescencia, de modo que quede ubicado en el centro de todo el punto de iluminación.
4. Coloque las rodajas de muestra y enfóquelas para observar. Durante el uso, cabe señalar que el filtro final no debe observarse directamente con los ojos para evitar daños oculares; Al observar muestras con un microscopio de aceite, se debe utilizar un microscopio de aceite especial no fluorescente; Una vez apagada la lámpara de mercurio de alta presión, no se puede volver a encender inmediatamente. Se necesitan 5 minutos para comenzar de nuevo; de lo contrario, será inestable y afectará la vida útil de la lámpara de mercurio.
(3) Al observar bajo un microscopio de fluorescencia en la plataforma de enseñanza usando un filtro de luz azul violeta, se puede ver que las células teñidas con 0.01 por ciento de colorante fluorescente naranja de acridina, el núcleo y el citoplasma se estimulan para producir dos diferentes colores de fluorescencia (verde oscuro y rojo anaranjado).
