La estructura especial de un microscopio de fluorescencia incluye:
(I) Sistema de filtro de color
El filtro de color es una parte importante del microscopio de fluorescencia, sus componentes principales son el filtro de luz de excitación (primer filtro de barrera), el filtro de luz de emisión (segundo filtro de barrera) y la composición mitad transparente y mitad antifiltro (espejo divisor del haz). . Varios fabricantes de modelos de filtros de color, el nombre a menudo no es uniforme.
1. Filtro de luz de excitación y filtro de luz de emisión: según la fuente de luz y las características del fluorocromo, generalmente se eligen los siguientes tres tipos de combinación para proporcionar un cierto rango de longitud de onda de la luz de excitación y hacer que la muestra se excite con fluorescencia a través de el ocular a la imagen.
Excitación UV: El filtro de luz de excitación permite la transmisión de luz UV y bloquea el paso de la luz visible por encima de 400 nm. El filtro de emisión correspondiente permite el paso de la luz azul, que aparece azul en el campo visual, p. ej. en la tinción DAPI.
Excitación de luz azul: el filtro de luz de excitación permite el paso de la luz azul, bloqueando otras longitudes de onda de luz. El filtro de emisión correspondiente permite el paso de luz verde, p. ej. para marcadores de tinción GFP.
Excitación verde: el filtro de excitación permite el paso de la luz verde, bloqueando otras longitudes de onda. El filtro de emisión correspondiente suele dejar pasar la luz roja, p. ej., tinción con rodamina.
2. Filtro semitransparente y semirreflectante: su función es bloquear completamente la excitación de la luz a través del reflejo; y a través del rango de longitud de onda correspondiente de la luz emitida. Su modelo corresponde a la excitación de los filtros de luz y a la emisión de los filtros de luz.
(B) lente objetivo y ocular
Se puede aplicar una variedad de lentes objetivo, pero es buena elección el lente objetivo acromático y simétrico, debido a su autofluorescencia es muy pequeña y sus propiedades de transmisión de luz (rango de longitud de onda) son adecuadas para la fluorescencia. Como el brillo de la fluorescencia de la imagen en el campo de visión del microscopio es proporcional al cuadrado de la velocidad de salida del objetivo e inversamente proporcional a su aumento, para mejorar el brillo de la imagen de fluorescencia, el objetivo con una velocidad de salida grande debe ser usado. Especialmente para las muestras de fluorescencia que no son lo suficientemente fuertes, se debe utilizar un objetivo de velocidad de boca grande y alta transmisión de luz, con el ocular lo más bajo posible.
(C) otros dispositivos ópticos
Reflector, su capa reflectante generalmente está chapada en aluminio, porque el aluminio en la luz ultravioleta y visible absorbe menos de la región azul-violeta, reflejando hasta un 90% o más (mientras que la reflectividad de la plata es solo del 70%). Generalmente se utilizan reflectores planos. Espejo reflector, diseñado y fabricado específicamente para microscopía de fluorescencia. Espejo reflector hecho de vidrio de cuarzo u otro vidrio transparente a los rayos UV. Dispositivo de luz descendente, que además de la función de fuente de luz transmitida, es más adecuado para muestras opacas y translúcidas, como películas gruesas, membranas filtrantes, colonias, cultivos de tejidos y otras muestras para observación directa. En los últimos años, se ha desarrollado un nuevo tipo de microscopio de fluorescencia que utiliza un dispositivo de luz descendente, llamado microscopio de fluorescencia descendente.
(D) fuente de luz
Hoy en día, se utiliza como fuente de luz una lámpara de mercurio de alta presión de 50 o 100 W. El trabajo de la descarga de los dos electrodos, causado por la evaporación del mercurio, la presión de la bola de aire aumenta rápidamente (este proceso generalmente toma alrededor de 5 ~ 15 minutos) y, en el proceso de emisión de cuantos de luz, la longitud de onda de la luz liberada es suficiente para excitar. Se utiliza habitualmente todo tipo de sustancias fluorescentes, por lo que para la microscopía de fluorescencia se utiliza habitualmente.
Las lámparas de mercurio tienen una vida útil relativamente corta, generalmente 200 horas, y en respuesta a esta limitación de vida útil, en los últimos años se ha utilizado ampliamente una nueva fuente de luz fluorescente, X-Cite, por su larga vida útil de 2000 horas y su uso flexible. - No requiere precalentamiento y está listo para usarse nada más sacarlo de la caja.
