El papel de cada filtro en microscopía de fluorescencia.
La cuestión más importante de la microscopía de fluorescencia es la combinación de filtros, y tanto el filtro de excitación como el filtro de protección deben ser adecuados para el cuerpo fluorescente observado y combinarse entre sí. Para ciertos fines específicos, si hay un error en la selección de un filtro, puede dar lugar a malentendidos e incluso resultados incorrectos. Los logros de la tecnología de microscopía de fluorescencia y el uso de filtros de alta calidad y grupos de filtros ingeniosos son inseparables. Existen varios tipos de filtros para microscopía de fluorescencia.
1. Filtro absorbente de calor
El filtro absorbente de calor es un filtro necesario para evitar que la radiación térmica en el espectro de la fuente de luz dañe el grupo de dispositivos ópticos. Los primeros microscopios avanzados estaban equipados con botellas en forma de tambor que podían contener agua destilada como dispositivos absorbentes de calor. Los microscopios de investigación modernos a gran escala están equipados con filtros de vidrio absorbentes de calor en cajas o cámaras de luz, que son láminas de vidrio transparentes y ligeramente amarillas. Los filtros KG1 (2 mm) y BG38 (4 mm) de Leitz pueden transmitir casi todos los espectros de luz ultravioleta y visible, lo que los convierte en filtros con un flujo luminoso de hasta el 98%. Sólo absorbe selectivamente las líneas de radiación fototérmica infrarroja.
2. Filtro de excitación
Los filtros de excitación pueden absorber selectivamente líneas espectrales de longitud de onda larga y solo transmitir luz ultravioleta. Los filtros para luz violeta, azul y verde son filtros de excitación. Zeiss, Reichert, Olympus B-series, G-series, BG series, Shott UG series, Opton H, G, BP series, Leitz BP series y otros filtros son todos filtros de excitación.
3. Filtro de bloqueo
El filtro de bloqueo es un filtro que absorbe selectivamente líneas espectrales de longitud de onda corta y radiación infrarroja, lo que permite al observador ver la fluorescencia emitida por el objeto que se está probando mientras protege la córnea del daño de los rayos UV.
4. Filtro de separación de luz de color.
El filtro de separación de luz de color es un filtro que refleja la luz de excitación sobre el objeto que se está probando, lo que hace que el objeto emita fluorescencia y luego transmite la fluorescencia al ocular. Este tipo de filtro sólo se puede utilizar en concentradores de haz descendente, mientras que la microscopía de fluorescencia de luz de transmisión no requiere separación de colores.
5. Filtro de interferencias
El filtro de interferencia es un tipo de filtro de excitación de alto rendimiento. Es un filtro elaborado apilando varias películas finas de metal entre dos láminas de vidrio pulido. El índice de refracción de cada película metálica delgada es diferente, por lo que las líneas espectrales de diferentes longitudes de onda de la fuente de luz de iluminación se reflejan repetidamente en cada película metálica, lo que hace que algunas longitudes de onda de las líneas espectrales se cancelen debido a interferencias destructivas, mientras que otras se fortalecen por Interferencia aditiva y transmitida. Esto da como resultado un filtro con un espectro de transmisión estrecho, un ancho de medio pico de sólo 6~20 nm y una transmitancia del 60%~70%.
