Los principios de la microscopía de fluorescencia y la microscopía confocal láser.
microscopio de fluorescencia
1. Un microscopio de fluorescencia es un dispositivo que utiliza luz ultravioleta como fuente de luz para iluminar el objeto que se está probando, provocando que emita fluorescencia y luego observa la forma y ubicación del objeto bajo el microscopio. La microscopía de fluorescencia se utiliza para estudiar la absorción, transporte, distribución y localización de sustancias intracelulares. Algunas sustancias de las células, como la clorofila, pueden emitir fluorescencia después de ser expuestas a la radiación ultravioleta; Aunque algunas sustancias por sí mismas no pueden emitir fluorescencia, también pueden emitir fluorescencia después de teñirlas con tintes fluorescentes o anticuerpos fluorescentes e irradiarlas con luz ultravioleta. La microscopía de fluorescencia es una de las herramientas para la investigación cualitativa y cuantitativa de estas sustancias.
2. Principio del microscopio de fluorescencia:
(A) Fuente de luz: La fuente de luz emite luz de varias longitudes de onda (desde ultravioleta hasta infrarroja).
(B) Fuente de luz del filtro de excitación: transmite luz de una longitud de onda específica que puede producir fluorescencia en la muestra, mientras bloquea la luz que es inútil para la fluorescencia de excitación.
(C) Muestra fluorescente: generalmente teñida con pigmento fluorescente.
(D) Filtro de bloqueo: transmite selectivamente la fluorescencia bloqueando la excitación que no ha sido absorbida por la muestra, y algunas longitudes de onda también se transmiten selectivamente en la fluorescencia. Microscopio que utiliza luz ultravioleta como fuente de luz para emitir fluorescencia de objetos irradiados. El microscopio electrónico fue ensamblado por primera vez por Knorr y Harroska en Berlín, Alemania, en 1931. Este tipo de microscopio utiliza haces de electrones de alta velocidad en lugar de haces de luz. Debido a la longitud de onda mucho más corta del flujo de electrones en comparación con las ondas de luz, el aumento del microscopio electrónico puede alcanzar 800000 veces, con un límite de resolución mínimo de 0,2 nanómetros. El microscopio electrónico de barrido, que empezó a utilizarse en 1963, permite a las personas ver las diminutas estructuras de la superficie de los objetos.
3. Ámbito de aplicación: Se utiliza para ampliar imágenes de objetos pequeños. Generalmente utilizado para la observación de biología, medicina, partículas microscópicas, etc.
microscopio confocal
1. Un microscopio confocal agrega una lente semirreflectante a la trayectoria de la luz reflejada, que desvía la luz reflejada que ya ha pasado a través de la lente hacia otras direcciones. Hay un deflector con un orificio en su punto focal y el pequeño orificio está ubicado en el punto focal. Detrás del deflector hay un tubo fotomultiplicador. Se puede imaginar que la luz reflejada antes y después del punto focal de la luz de detección no se puede enfocar en el pequeño orificio a través de este sistema confocal y será bloqueada por el deflector. Entonces lo que mide el fotómetro es la intensidad de la luz reflejada en el punto focal.
2. Principio: los microscopios ópticos tradicionales utilizan una fuente de luz de campo y la imagen de cada punto de la muestra se ve afectada por la difracción o la luz dispersada de puntos adyacentes; El microscopio confocal de barrido láser utiliza una fuente de luz puntual formada por un rayo láser que pasa a través de un orificio iluminado para escanear cada punto en el plano focal de la muestra. Se obtiene una imagen del punto iluminado en la muestra en el orificio de la sonda y el tubo fotomultiplicador (PMT) o el dispositivo de acoplamiento termoeléctrico (cCCD) lo recibe punto por punto o línea después del orificio de la sonda, formando rápidamente una imagen fluorescente en la pantalla del monitor de la computadora. . El orificio de iluminación y el orificio de detección están conjugados con respecto al plano focal de la lente objetivo. Los puntos en el plano focal se enfocan simultáneamente en el orificio de iluminación y en el orificio de emisión, y los puntos fuera del plano focal no se reproducen en el orificio de detección. Esto da como resultado una imagen confocal que es la sección transversal óptica de la muestra, superando el inconveniente de la borrosidad en las imágenes microscópicas generales.
3. Campos de aplicación: medicina, investigación animal y vegetal, bioquímica, bacteriología, biología celular, embriología de tejidos, ciencia de los alimentos, genética, farmacología, fisiología, óptica, patología, botánica, neurociencia, biología marina, ciencia de materiales, ciencia electrónica, mecánica. , geología del petróleo y mineralogía.
