El principio y las características estructurales de la microscopía de fluorescencia.
La microscopía de fluorescencia utiliza un punto con alta eficiencia luminosa para emitir una cierta longitud de onda de luz (como luz ultravioleta de 3650 pulgadas o luz azul violeta de 4200 pulgadas) a través de un sistema de filtrado de color como luz de excitación, y excita las sustancias fluorescentes en la muestra para emitir varios colores de fluorescencia. Después de eso, se observa a través de la ampliación de la lente del objetivo y el ocular. De esta manera, es fácil de reconocer incluso cuando la fluorescencia es muy débil contra un fondo fuerte, con una alta sensibilidad. Se utiliza principalmente para el estudio de la estructura y función celular, así como de la composición química. La estructura básica de un microscopio de fluorescencia se compone de un microscopio óptico ordinario más accesorios como una fuente de luz fluorescente, un filtro de excitación, un separador de haz dicroico y un filtro de bloqueo. Las fuentes de luz fluorescente generalmente usan lámparas de mercurio de ultra alta presión (50-200W), que pueden emitir luz de varias longitudes de onda. Sin embargo, cada sustancia fluorescente tiene una longitud de onda de luz de excitación que produce la fluorescencia más fuerte, por lo que es necesario agregar filtros de excitación (generalmente filtros de excitación ultravioleta, púrpura, azul y verde) para permitir que solo una cierta longitud de onda de luz de excitación penetre e irradie el espécimen, mientras absorbe toda la otra luz. Después de ser irradiada por la luz de excitación, cada sustancia emite una fluorescencia visible más larga que la longitud de onda de la irradiación en muy poco tiempo. La fluorescencia tiene especificidad y generalmente es más débil que la luz de excitación. Para observar una fluorescencia específica, es necesario agregar bloqueo (o supresión) detrás de la lente del objetivo y usarlo en combinación.
Diferencia entre microscopio de fluorescencia y microscopio ordinario.
1. El método de iluminación suele ser del tipo de haz descendente, en el que la fuente de luz se proyecta sobre la muestra a través de una lente objetivo;
2. La fuente de luz es luz ultravioleta, con una longitud de onda más corta y una resolución más alta que los microscopios ordinarios;
3. Hay dos filtros especiales, el que está frente a la fuente de luz se usa para filtrar la luz visible, y el que está entre el ocular y la lente del objetivo se usa para filtrar los rayos ultravioleta para proteger el ojo humano.
La microscopía de fluorescencia también es un tipo de microscopía óptica, y la principal diferencia son las diferentes longitudes de onda de excitación. Esto determina las diferencias en estructura y uso entre la microscopía fluorescente y la microscopía óptica ordinaria.
La microscopía de fluorescencia es una herramienta básica para la citoquímica de inmunofluorescencia. Se compone de componentes principales como una fuente de luz, un sistema de placa de filtro y un sistema óptico. Utiliza una cierta longitud de onda de luz para excitar la muestra para que emita fluorescencia y la magnifica a través de una lente objetivo y un sistema ocular para observar la imagen de fluorescencia de la muestra.
