Los fundamentos y elementos estructurales de un microscopio de fluorescencia.
La microscopía de fluorescencia utiliza un punto con alta eficiencia luminosa para emitir luz de una cierta longitud de onda (como luz ultravioleta de 3650 in o luz azul púrpura de 4200 in) a través del sistema de filtro como luz de excitación para excitar las sustancias fluorescentes en la muestra para emitir fluorescencia de varios colores Después de eso, observe a través de la ampliación de la lente del objetivo y el ocular. De esta forma, bajo un fondo de fuerte contraste, incluso si la fluorescencia es muy débil, es fácil de identificar y tiene una alta sensibilidad. Se utiliza principalmente para la investigación de la estructura y función celular y la composición química. La estructura básica de un microscopio de fluorescencia se compone de un microscopio óptico ordinario más algunos accesorios (como una fuente de luz fluorescente, un filtro de excitación, un divisor de haz de dos colores y un filtro de bloqueo, etc.). Fuente de luz fluorescente: generalmente utiliza una lámpara de mercurio de ultra alta presión (50-200W), que puede emitir luz de varias longitudes de onda, pero cada sustancia fluorescente tiene una longitud de onda de excitación que produce la fluorescencia más fuerte, por lo que un filtro de excitación (generalmente, hay filtros de excitación ultravioleta, púrpura, azul y verde), que solo permiten el paso de la luz de excitación de una cierta longitud de onda e irradian la muestra, mientras absorben otra luz. Después de que cada sustancia es irradiada por la luz de excitación, emite fluorescencia visible con una longitud de onda más larga que la longitud de onda de la irradiación en muy poco tiempo. La fluorescencia es específica y generalmente más débil que la luz de excitación. Para observar una fluorescencia específica, se debe agregar bloqueo (o supresión) detrás de la lente del objetivo y usarse junto con ella.
La diferencia entre el microscopio de fluorescencia y el microscopio ordinario.
1. El método de iluminación suele ser episcópico, es decir, la fuente de luz se proyecta sobre la muestra a través de la lente del objetivo;
2. La fuente de luz es luz ultravioleta, la longitud de onda es más corta y la resolución es más alta que la de los microscopios ordinarios;
3. Hay dos filtros especiales, el que está frente a la fuente de luz se usa para filtrar la luz visible y el que está entre el ocular y la lente del objetivo se usa para filtrar los rayos ultravioleta para proteger el ojo humano.
El microscopio de fluorescencia también es un tipo de microscopio óptico, la principal diferencia es que la longitud de onda de excitación de los dos es diferente. Esto determina la diferencia entre el microscopio de fluorescencia y el microscopio óptico ordinario en términos de estructura y uso.
La microscopía de fluorescencia es una herramienta esencial en la citoquímica inmunofluorescente. Se compone de componentes principales como fuente de luz, sistema de placa de filtro y sistema óptico. Es usar una cierta longitud de onda de luz para excitar la muestra para que emita fluorescencia y observar la imagen de fluorescencia de la muestra amplificando la lente del objetivo y el sistema ocular.
