La diferencia entre el microscopio confocal láser y el microscopio óptico tradicional
La microscopía de fluorescencia confocal de barrido láser es un instrumento de análisis de biología celular y molecular relativamente avanzado que utiliza tecnología informática, láser y de procesamiento de imágenes para obtener datos tridimensionales de muestras biológicas. Se utiliza principalmente para observar la estructura de las células vivas y los cambios biológicos de moléculas e iones específicos, análisis cuantitativo y determinación cuantitativa en tiempo real.
El principio de la microscopía confocal láser: use el orificio de iluminación colocado detrás de la fuente de luz y el orificio de detección ubicado frente al detector para realizar la iluminación puntual y la detección puntual. La luz emitida por la fuente de luz a través del orificio de iluminación se enfoca en un punto en el plano focal de la muestra, y la fluorescencia emitida desde este punto se refleja en el orificio de detección, y cualquier luz emitida fuera de este punto es bloqueada por la detección. agujerito. El agujero de alfiler de iluminación y el agujero de alfiler de detección se conjugan con el punto irradiado o el punto detectado, por lo que el punto detectado es el punto confocal, y el plano donde se encuentra el punto detectado es el plano confocal.
La computadora muestra los puntos detectados en la pantalla de la computadora en forma de puntos de imagen. Para generar una imagen completa, el sistema de escaneo en el camino óptico escanea en el plano focal de la muestra para generar una imagen confocal completa. Siempre que la plataforma se mueva hacia arriba y hacia abajo a lo largo del eje Z, una nueva capa de la muestra se mueve al plano confocal y la nueva capa de la muestra se refleja en el monitor. Con el movimiento continuo del eje Z se pueden obtener imágenes continuas de diferentes capas de la muestra. Imagen de corte de luz.
La diferencia entre los microscopios de luz tradicionales
Los microscopios de fluorescencia tradicionales tienen un inconveniente insuperable: las estructuras fluorescentes fuera del plano focal se ven borrosas y borrosas. La razón es que la mayoría de los especímenes biológicos tienen estructuras superpuestas. Si las estructuras marcadas con fluorescencia se distribuyen en diferentes niveles y se superponen, la lente objetivo también recibe la fluorescencia dispersa desde arriba o debajo del plano focal, y la resolución del microscopio de fluorescencia mejorará considerablemente. reducir.
Sobre la base de los microscopios ópticos tradicionales, los microscopios confocales de escaneo láser utilizan la luz láser como fuente de luz, adoptan el principio y el dispositivo de enfoque conjugado y utilizan computadoras para realizar el procesamiento, la observación, el análisis y la salida de imágenes digitales de los objetos observados. La muestra se puede escanear tomográficamente y obtener imágenes para la observación y el análisis no destructivos de la estructura espacial tridimensional de las células. Al mismo tiempo, mediante el uso de sondas de etiquetado inmunofluorescente y de ion fluorescente, esta tecnología no solo puede observar células fijas y secciones de tejido, sino también realizar una observación y detección dinámicas en tiempo real de la estructura, las moléculas, los iones y las actividades vitales de las células vivas. a nivel subcelular La observación de señales fisiológicas como Ca2 plus, valor de pH, potencial de membrana y cambios en la morfología celular se ha convertido en una nueva generación de potentes herramientas de investigación en los campos de la morfología, la biología celular molecular, la neurociencia, la farmacología y la genética.
