El uso correcto de la microscopía de fluorescencia invertida.
El microscopio de fluorescencia invertida es un microscopio multifuncional utilizado en el campo de la investigación en ciencias biológicas de alto nivel. Su estructura es compleja y costosa. Por lo tanto, para que los estudiantes de posgrado en medicina dominen correctamente el funcionamiento y los estándares de uso del microscopio de fluorescencia invertida, los profesores deben enseñar primero los conocimientos básicos del microscopio de fluorescencia invertida antes de demostrar el funcionamiento real del microscopio de fluorescencia invertida. Deben presentar la estructura, el principio, la función y los métodos de uso básicos del microscopio de fluorescencia invertida, y luego demostrar diferentes funciones para diferentes muestras en operaciones de uso específicas, estandarizando gradualmente la operación y el uso del microscopio de fluorescencia invertida para estudiantes de posgrado en medicina.
1. Uso correcto de la observación visual. Una de las funciones de un microscopio de fluorescencia invertido es observar en un campo de visión brillante. Su principio básico es lograr imágenes en un fondo brillante basándose en la diferente absorción de luz de cada parte de la muestra después de ser iluminada por la luz. Es principalmente adecuado para observar células teñidas o coloreadas, cortes de tejido y otras muestras.
2. Uso correcto de la observación diferencial. La segunda función del microscopio de fluorescencia invertida es la observación de la diferencia de fase. Su principio básico es convertir la diferencia de trayectoria óptica de diferentes partes de la muestra en diferencia de amplitud y observar a través de un objetivo de diferencia de fase con una placa de fase y un foco con apertura circular. Es principalmente adecuado para observar células vivas o cortes de tejido sin teñir. En el proceso de enseñanza experimental, además de guiar correctamente a los estudiantes de posgrado en medicina para que sigan los métodos operativos básicos de observación de diferencia de fase, es más importante guiarlos para que comprendan y dominen las muestras utilizando la observación de diferencia de fase. Para ellos, el método más utilizado en futuras investigaciones científicas es la observación microscópica de células cultivadas. En primer lugar, para la selección del equipo celular, generalmente se recomienda utilizar placas de cultivo, platos y botellas de vidrio y materiales plásticos. En su mayoría son incoloros y transparentes, y pueden observarse directamente bajo un microscopio de fluorescencia invertida sin necesidad de verter líquido celular ni someterse a otros tratamientos. En segundo lugar, durante la observación microscópica, no abra la tapa del equipo casualmente para evitar contaminar las células. Finalmente, los operadores deben usar guantes, máscaras y batas blancas no solo para proteger su propia salud sino también para prevenir la contaminación celular.
3. Uso correcto de la observación de fluorescencia. La tercera función de un microscopio de fluorescencia invertida es la observación de la fluorescencia. Su principio básico es utilizar luz de excitación para excitar la muestra y producir fluorescencia, logrando así la observación de la forma y el posicionamiento de la muestra. Es principalmente adecuado para observar muestras marcadas con fluorescencia. La observación de la fluorescencia es una función importante de la microscopía de fluorescencia invertida, con accesorios costosos y usos especiales. Para que los estudiantes de posgrado en medicina dominen correctamente las normas operativas de la observación de fluorescencia, los maestros no solo les enseñan los métodos operativos básicos, sino, lo que es más importante, les enseñan su singularidad. En primer lugar, en la preparación de la muestra, la superficie del portaobjetos y el cubreobjetos deben ser lisas y el grosor debe ser apropiado (el portaobjetos debe tener entre 0.8 mm y 1,2 mm, y el cubreobjetos debe tener alrededor de {{5). }}.17 mm); La muestra debe tener un espesor adecuado evitando al mismo tiempo la superposición de células o el enmascaramiento de impurezas; El agente sellador debe utilizar una mezcla igual de glicerol y tampón de carbonato (0.5mol/L pH 9.0-9.5). En segundo lugar, antes de la observación de la fluorescencia, las luces de la habitación y la luz blanca del microscopio de fluorescencia invertida deben apagarse para garantizar que se encuentren en un ambiente de habitación oscura. Finalmente, en la observación de fluorescencia, el tiempo de observación debe controlarse estrictamente, generalmente 1-2 horas por vez, de lo contrario la fluorescencia decaerá y desaparecerá; Al ajustar la fuente de luz, se deben usar gafas protectoras para evitar daños por rayos UV en las gafas.
4. Uso correcto de la captura de imágenes. En la investigación científica, no solo se requiere que la microscopía de fluorescencia invertida pueda lograr múltiples observaciones, sino también que la microscopía de fluorescencia invertida pueda lograr la captura de imágenes. El sistema de microscopio de fluorescencia invertido combina un microscopio óptico con una computadora mediante conversión fotoeléctrica, lo que permite no solo la observación microscópica en el ocular, sino también la observación, edición y almacenamiento dinámico de imágenes en tiempo real en la computadora.
