Parámetros técnicos y habilidades de uso del microscopio de fluorescencia.
Parámetros técnicos del microscopio de fluorescencia 1. Ocular de gran angular 2. Lente de objetivo acromático 3. Convertidor de lente de objetivo de cuatro orificios 4. Dispositivo de fluorescencia descendente Sistema de excitación azul (B) Verde (G) Lámpara de mercurio de 100W 5. Coaxial grueso mecanismo de microenfoque: rango de enfoque 15 mm Valor de la microrrejilla 0,002 mm 6. Rango de movimiento longitudinal del banco de trabajo mecánico de doble capa: 70 mm Rango de movimiento lateral: 50 mm
Parámetros técnicos del microscopio de fluorescencia
1. Ocular gran angular
2. Lente objetivo acromática
3. Convertidor de lente de objetivo de cuatro orificios
4. Dispositivo de fluorescencia descendente Azul (B) Verde (G) Sistema de excitación Lámpara de mercurio de 100 W
Mecanismo de microenfoque coaxial grueso: rango de enfoque: 15 mm, valor de microrrejilla: 0,002 mm
6. Banco de trabajo mecánico de doble capa.
Rango de movimiento longitudinal: 70 mm Rango de movimiento lateral: 50 mm
Consejos y métodos para usar la microscopía de fluorescencia
(1) Diapositiva
El grosor del portaobjetos debe estar entre 0,8 y 1,2 mm. Si el portaobjetos es demasiado grueso, por un lado, absorbe demasiada luz y, por otro lado, no puede provocar que la luz de excitación se acumule en la muestra. El portaobjetos debe ser liso y limpio, con un espesor uniforme y sin fluorescencia espontánea significativa. A veces se necesitan portaobjetos de vidrio de cuarzo.
(2) Cubierta de vidrio
El grosor de la cubierta de vidrio es de aproximadamente 0,17 mm, y es liso y limpio. Para mejorar la excitación, también se puede utilizar un cubreobjetos de interferencia. Este es un cubreobjetos especial recubierto con varias capas de sustancias (como el fluoruro de magnesio) que tienen diferentes efectos de interferencia en diferentes longitudes de onda de la luz. Puede permitir que la fluorescencia pase sin problemas, mientras refleja la excitación, que puede excitar la muestra.
(3) Muestra
Las secciones de tejido u otras muestras no deben ser demasiado gruesas. Por ejemplo, si son demasiado gruesas, la mayor parte de la luz de excitación se consume en la parte inferior de la muestra, mientras que la parte superior observada directamente por la lente del objetivo no se excita lo suficiente. Además, la superposición de células o el enmascaramiento de impurezas pueden afectar el juicio.
(4) Agente de montaje
La glicerina se usa comúnmente como agente de montaje y debe estar libre de fluorescencia espontánea, incolora y transparente. El brillo de la fluorescencia es más brillante a un pH de 8,5 a 9,5, y no es fácil que se desvanezca rápidamente. Por lo tanto, una mezcla equivalente de glicerol y 0.5 mol/l de solución tampón de carbonato con un pH de 9.0 a 9.5 se usa comúnmente como agente de montaje.
(5) Aceite de espejo
Generalmente, cuando se usa un microscopio de fluorescencia de campo oscuro y un microscopio de aceite para observar muestras, es necesario usar aceite para lentes. Lo mejor es utilizar un aceite especial para lentes no fluorescente, que también se puede sustituir por el mencionado glicerol. También se puede utilizar parafina líquida, pero el índice de refracción es bajo, lo que tiene un ligero impacto en la calidad de la imagen.
