Estructura y componentes principales de un microscopio de fluorescencia
La microscopía de fluorescencia es una herramienta esencial en la citoquímica inmunofluorescente. Se compone de componentes principales como fuente de luz, sistema de placa de filtro y sistema óptico. Es usar una cierta longitud de onda de luz para excitar la muestra para que emita fluorescencia y observar la imagen de fluorescencia de la muestra amplificando la lente del objetivo y el sistema ocular.
Estructura y componentes principales de un microscopio de fluorescencia
(1) fuente de luz
Hoy en día, las lámparas de mercurio de ultra alta presión de 200 W se utilizan a menudo como fuentes de luz. Están hechos de vidrio de cuarzo, con una forma esférica en el medio, y en su interior se rellena una cierta cantidad de mercurio. Durante el trabajo, la descarga entre los dos electrodos hace que el mercurio se evapore y la presión del aire en la bola aumenta rápidamente. Cuando el mercurio se evapora por completo, puede alcanzar 50-70 presión atmosférica estándar, y este proceso generalmente toma alrededor de 5-15 minutos. La luminiscencia de la lámpara de mercurio de ultra alta presión es el resultado de la emisión de cuantos de luz durante la continua disociación y reducción de las moléculas de mercurio por la descarga entre los electrodos. Emite una fuerte luz ultravioleta y azul-violeta, que es suficiente para excitar varias sustancias fluorescentes, por lo que se usa ampliamente en microscopía de fluorescencia.
Las lámparas de mercurio de ultra alta presión también emiten mucho calor. Por lo tanto, la carcasa de la lámpara debe tener buenas condiciones de disipación de calor y la temperatura ambiente de trabajo no debe ser demasiado alta.
La nueva lámpara de mercurio de ultra alta presión se puede encender sin alto voltaje al comienzo del uso. Después de un período de uso, debe iniciarse con alto voltaje (alrededor de 15000 V). Después de comenzar, el voltaje de trabajo de mantenimiento es generalmente 50-60V, y la corriente de trabajo es de aproximadamente 4A. La vida útil promedio de una lámpara de mercurio de ultra alta presión de 200 W es de aproximadamente 200 horas si se usa durante 2 horas cada vez. Cuanto más corto sea el tiempo de trabajo, más corta será la vida útil. Si solo se usa durante 20 minutos, la vida útil se reducirá en un 50 por ciento. Por lo tanto, minimice el número de arranques cuando lo use. Durante el uso de la bombilla, su eficacia luminosa se reduce gradualmente. Después de que se apague la luz, espere a que se enfríe antes de reiniciar. No apague la bombilla inmediatamente después de encenderla, para no dañar el electrodo debido a la evaporación incompleta del mercurio. En general, debe esperar 15 minutos. Debido a la alta presión de la lámpara de mercurio de ultra alta presión y los fuertes rayos ultravioleta, la bombilla debe colocarse en la cámara de la lámpara antes de que pueda encenderse, para no dañar los ojos y provocar el funcionamiento en caso de explosión. .
El circuito de la fuente de luz de la lámpara de mercurio de ultra alta presión (100 W o 200 W) y varias partes, incluido el transformador, el balasto y el arranque. Hay un sistema para ajustar el centro luminoso de la bombilla en la cámara de la lámpara. Se instala un reflector cóncavo revestido de aluminio detrás de la bombilla y una lente colectora de luz se instala en la parte delantera.
La lámpara de mercurio de ultra alta presión doméstica GCQ-200 tiene un buen rendimiento y puede reemplazar las bombillas importadas como HBO-200. La vida útil promedio es de más de 200 horas y el precio es relativamente bajo.
Un dispositivo de fuente de luz fluorescente de tungsteno de bromo de alta temperatura de color simple y portátil desarrollado en mi país tiene un tamaño pequeño, peso ligero, baja potencia, uso dual de CA y CC (con fuente de alimentación de CC), fácil de transportar, fácil de usar y tiene sido popularizado y aplicado.
(2) Sistema de filtro de color
El sistema de filtro de color es una parte importante del microscopio de fluorescencia, que consta de una placa de filtro de excitación y una placa de filtro de presión. El modelo de placa de filtro y el nombre de cada fabricante a menudo no son uniformes. Las placas de filtro generalmente reciben el nombre del color básico, las letras al frente representan el color, las letras en la parte posterior representan el vidrio y los números representan las características del modelo. microscopio olimpo
(3) lente objetivo
Se pueden usar varias lentes de objetivo, pero se usan lentes de objetivo acromáticas porque su autofluorescencia es mínima y sus propiedades de transmisión de luz (rango de longitud de onda) son adecuadas para la fluorescencia. Dado que el brillo de fluorescencia de la imagen en el campo de visión del microscopio es proporcional al cuadrado de la relación de apertura de la lente del objetivo e inversamente proporcional a su aumento, para mejorar el brillo de la imagen de fluorescencia, una lente de objetivo con un gran Se debe utilizar la relación de apertura. Especialmente a gran aumento, su efecto es muy evidente. Por lo tanto, para muestras con fluorescencia insuficiente, se debe usar una lente objetivo con una gran relación de apertura con un ocular lo más bajo posible (4×, 5×, 6,3×, etc.).
(4) espejo
La capa reflectante del reflector generalmente está recubierta de aluminio, porque el aluminio absorbe menos en la región azul-violeta de la luz ultravioleta y la luz visible, y el reflejo es más del 90 por ciento, mientras que el reflejo de la plata es solo del 70 por ciento. Generalmente, se utiliza un reflector plano.
(5) condensador
Los condensadores diseñados para microscopía de fluorescencia están hechos de vidrio de cuarzo u otro vidrio transparente a los rayos UV. Hay dos tipos de condensadores de campo claro y condensadores de campo oscuro. También hay concentradores de fluorescencia de contraste de fase.
(6) dispositivo Epi-luz
El nuevo tipo de dispositivo de epi-luz es que después de que la luz de la fuente de luz golpea el filtro espectroscópico de interferencia, la parte de longitud de onda corta (ultravioleta y azul púrpura) se refleja debido a las propiedades del revestimiento del filtro. Cuando el filtro se enfrenta a la fuente de luz, el ángulo es de 45. Cuando está inclinado, dispara a la lente del objetivo verticalmente y dispara a la muestra a través de la lente del objetivo, de modo que la muestra se excita. En este momento, la lente del objetivo actúa directamente como colector de luz. Al mismo tiempo, la parte larga del filtro (verde, amarillo, rojo, etc.) es transparente al filtro, por lo que no se refleja en la dirección de la lente del objetivo, y el filtro actúa como una placa de filtro de excitación. Debido a que la fluorescencia de la muestra se encuentra en la región de longitud de onda larga de la luz visible, puede atravesar el filtro y alcanzar el ocular para su observación, el brillo de la imagen fluorescente aumenta con el aumento de la ampliación y es más fuerte que la luz transmitida. fuente a gran aumento. Además de la función de una fuente de luz de transmisión, es más adecuado para la observación directa de muestras opacas y translúcidas, como cortes gruesos, membranas de filtro, colonias y muestras de cultivo de tejidos. Los nuevos microscopios de fluorescencia desarrollados en los últimos años utilizan principalmente dispositivos de epi-luz, que se denominan microscopios de epi-fluorescencia.
